甘草地上部分脂溶性成分抗氧化及抗CNP活性研究

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甘草地上部分资源丰富,含有多种活性成分如黄酮类、多糖类,具有极高的利用价值。民间利用甘草叶泡茶治疗慢性前列腺炎有良好的效果。然而,由于缺乏深入和较为系统的理论研究,现阶段甘草地上部分资源并未得到有效的开发和利用,多在牧区作为牧草使用或被废弃,造成了自然资源的浪费。为更好的开发和利用甘草地上部分资源,在课题组前期对甘草地上部分水溶性成分活性研究的基础上,本论文对甘草地上部分的脂溶性成分进行了研究。首先,对甘草地上部分主要脂溶性成分进行了液质联用定性分析,并考察了活性成分的富集纯化工艺,然后进行了抗氧化和抗CNP活性研究。研究结果如下:(1)建立了甘草地上部分脂溶性成分高效液相指纹图谱检测方法,通过HPLC-MS检测对甘草地上部分脂溶性成分进行了定性分析。高效液相色谱条件为:DIKMA Diamonsil(?)-C18分析柱(4.6×250mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸-水溶液梯度洗脱,体积流量1mL/min,柱温35℃,检测波长280nm,350nm。结果表明,该液相条件可以较好的分离PAPL部分的成分,色谱峰分离度良好,方法稳定可行。定性结果发现,甘草地上部分含有槲皮素、金雀异黄酮、生松素、乌拉尔宁等成分。本实验建立的HPLC-DAD指纹图谱检测方法能较好的反映甘草地上部分的成分,为甘草地上部分成分研究奠定了基础。(2)考察了甘草地上部分脂溶性成分富集纯化工艺。取甘草地上部分脂溶性部分样品,甲醇溶解,以树脂A吸附拌样,将除杂后的树脂A置于大孔树脂顶部,以一定体积分数的乙醇溶液进行洗脱。结果表明,树脂A与大孔树脂联用能有效富集甘草地上部分脂溶性活性成分。最佳纯化工艺为样品与树脂A质量比为1:1,样品与大孔树脂质量比1:10,70%乙醇洗脱,收集洗脱液6BV。经该工艺纯化后的脂溶性成分质量分数为(51.6±2.0)%,收率为(73.8±3.5)%。该方法解决了脂溶性成分的大孔树脂上样问题,有效提高了活性成分的含量,且工艺简单,有良好的应用前景。(3)验证了甘草地上部分脂溶性成分具有良好的抗氧化活性。通过系统溶剂萃取法将甘草地上部分脂溶性成分分为氯仿部位和乙酸乙酯部位,通过体外抗氧化活性测定甘草地上部分脂溶性成分及各萃取部位纯化前后的清除DPPH自由基能力、清除羟基自由基能力、还原能力及总抗氧化能力。结果表明,甘草地上部分脂溶性成分及各分段部位有较强的抗氧化能力,其中,乙酸乙酯萃取物富集部位的体外抗氧化能力最强。富集后,各部位抗氧化能力均增强,且呈量效关系。本研究表明甘草地上部分脂溶性成分有良好的抗氧化活性,有天然抗氧化剂的开发价值。(4)验证了甘草地上部分脂溶性成分有良好的抗CNP活性。以化学致炎法建立大鼠CNP模型,对PAPL部分富集部位抗CNP活性进行验证,以前列康为阳性对照,对比了甘草地上部分水溶性成分和脂溶性成分抗CNP活性。结果表明,该方法可成功建立大鼠CNP模型,给药结果表明,甘草地上部分有一定程度的抗CNP活性。从组织病理结果分析,甘草地上部分脂溶性成分可有效减轻CNP大鼠腺体组织病变程度、炎性细胞浸润程度和组织纤维化程度,对炎症因子TNF-α、MCP-1、PGE2、α-SMA的降低作用与阳性药无显著差异,表明甘草地上部分脂溶性成分有良好的抗CNP活性。
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