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本文研究了碱性成纤维细胞生长因子对Myostatin基因表达的影响及机制。文章分为五个部分。
一、本文首次克隆到中国小尾寒羊18kDa-bFGF基因的全编码序列，从分子特征与分子进化的角度进行了分析。
二、构建真核表达载体pCMv-neo-bFGF，转染C2C12细胞以及注射小鼠后腿肌肉，实现外源性bFGF基因在细胞和骨骼肌内表达，实时荧光定量PCR和western blot检测细胞和骨骼肌内源性myostatin基因的表达水平。
三、将小尾寒羊bFGF基因克隆进原核表达载体pET-28a，构建成原核表达载体pET-28a-bFGF，转化人肠杆菌BL21。在IPTG的诱导下，实现了目标蛋白在大肠杆菌中的成功表达。
四、将本实验所获得的重组羊bFGF添加到细胞培养液中，或用3种信号通路抑制剂预处理细胞，以探讨bFGF对C2C12细胞的促生长作用及其作用机制。
五、本部分旨在初步探索bFGF与myostatin之间互作关系的调控机制。在PD98059和/或bFGF处理细胞后，实时荧光定量PCR检测细胞内源性myostatin的转录水平，western blot检测胞内ERKl/2的磷酸化程度。