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第一部分 hsa-mir-7是一种潜在的人类特发性炎症性肌病合并间质性肺病的生物标志物目的特发性炎症性肌病(idiopathic inflammatory myopathies,IIMs)是一组罕见的自身免疫性疾病,其特征是骨骼肌无力和炎症。IIMs主要包括多发性肌炎(polymyositis,PM)、免疫介导的坏死性肌病(immune-mediated necrotizing myopathy,IMNM)、散发性包涵体肌炎(sporadic inclusion-body myositis,sIBM)、非特异性肌炎(nonspeific myositis,NSM)和皮肌炎(dermatomyositis,DM)。microRNAs(miRNAs)调节广泛的发育以及生理细胞过程。研究关于IIMs产生和诊断的新方法,如研究miRNAs对关于IIMS新疗法的发展和/或更好的治疗、诊断至关重要。目前循环miRNAs在特发性炎症性肌病(IIMs)诊断中的意义尚不清楚。在本研究中,我们旨在探讨循环miRNAs作为预测IIMs和间质性肺病(ILD)患者的潜在生物标志物的意义。方法实验具体分为研究组和对照组两组。患者均为我院自2015年03月至2018年02月期间收治的患者,并经临床和病理明确诊断为特发性炎症性肌病。共收集43例未经任何治疗的新发IIMs患者的血清样本,其中13例IIMs患者诊断为PM,其余30例诊断为DM。PM和DM患者均符合Bohan&Peter或Dalakas诊断标准。另外采集43例健康体检人群血清作为对照。本研究收集的所有血浆样本均获得参与者的知情同意,并通过医院伦理委员会评审。然后从43名IIMs患者和43名健康人的血清样本中分别提取总RNA。采用miRNA微阵列芯片筛选并分析两组人群血清样本中的miRNAs表达谱差异,最后采用qRT-PCR进行验证。结果微阵列芯片显示IIMs患者的循环miRNAs表达谱与健康对照组相比,差异显著(P<0.05)。qRT-PCR证实,IIM患者和健康对照组的血浆样品中的mir-7和mir-21水平有显著差异(p<0.05)。然而,只有miR-7在每一个IIM患者中是均呈现过低表达(P<0.05),另外miR-7在IIM/ILD患者血清中比未合并ILD的IIMs患者表达低(P<0.05)。将IIM/ILD患者与未合并ILD的IIMs患者进行区分的曲线下面积(AUC)为0.8978,95%置信区间为0.7961～0.9995。受试者操作特性曲线(ROC)分析表明,miR-7的截止值为0.0063。此外,AUC分析显示,对于来自健康控制的IIMs患者,miR-7和miR-21都具有诊断价值;然而,miR-7更敏感。结论循环miR-7是一种IIMs患者的潜在生物学诊断标志物,可用于区分IIM/ILD患者和未合并ILD的IIMs患者。第二部分B细胞激活因子(BAFF)与特发性炎症性肌病的进程目的特发性炎症性肌病是一种组织病理形态学的诊断,分析特发性炎症性肌病患者在分子免疫病理水平的变化,有助于疾病诊断,及为临床治疗提供更加可靠的根据。本实验将评价血浆B细胞激活因子(BAFF)表达水平在特发性炎症性肌病的进程重要性。方法选取我院2015年03月至2018年02月共收治的IIMs患者61名,患者除包涵体肌炎(IBM)外均采用强的松单药给与口服治疗,具体口服给药剂量如下。强的松起始剂量为lmg/kg早晨頓服,同时观察患者肌力改善程度和检测血浆CK表达水平变化,待肌力改善和血浆CK表达下降时,强的松口服剂量以5mg/w减量,直至维持口服剂量20-30mg/qod。通过ELISA法检测血清BAFF水平,免疫组化检测肌肉组织相关分子的表达水平。结果病理诊断61名IIMs患者中21例IIMs患者诊断为PM,其余40例诊断为DM患者。治疗前IIMs组患者中皮肌炎(DM)患者血浆B细胞激活因子(BAFF)表达水平为(3673±778)pg/ml,多发性肌炎(PM)患者血浆BAFF表达水平为(1673±621)pg/ml,而正常对照组患者血清BAFF表达水平仅为(681±107)pg/ml。统计学分析提示无论DM还是PM患者血清BAFF表达水平均显著高于正常健康者(P<0.05);而同时,DM患者血清BAFF表达水平也明显高于PM患者(P<0.05)。强的松足量治疗后,DM组患者血清BAFF表达水平为(763±106)pg/ml,PM组患者血清BAFF表达水平为(661±87)pg/ml。统计学分析提示强的松足量治疗前后无论DM还是PM组患者血清BAFF表达水平下降显著(P<0.05)。结论作为肿瘤坏死因子超家族成员的BAFF参与DM和PM的特发性炎症性肌病患者的疾病进程,其表达水平与疾病转归呈负相关,通过检测血浆BAFF的表达水平,可为临床判断DM和PM患者治疗疗效提供准确的参考依据。第三部分探讨细胞因子、协同刺激分子在特发性炎症性肌病中的诊断和鉴别诊断的应用价值目的探讨肌肉组织中CD4+和CD8+T细胞浸润,以及外周血CD4+和CD8+T细胞协同刺激分子ICOS和OX40表达,在IIMs诊断和鉴别诊断中的应用价值。方法本研究对2015年03月到2018年02月在苏州大学附属第一医院收治的36例IIMs患者,均经过肌肉活检病理证实,其中PM患者26例,DM患者10例,平均年龄分别为43.7±6.9岁和46.5±7.2岁。同时,采用36例肌肉活检病理正常但有明显肌无力症状的其他系统疾病患者作为阴性对照组。以上研究对象肌肉组织样本均采用冰冻包埋保存,同时采取血液样本分离血清后-196度液氮保存。明确IIMs各亚组的临床、组织学和免疫病理特征。采用免疫组化染色(IHC)检测各亚组肌肉组织中CD4+和CD8+T细胞在特发性炎症性肌病及对照人群中的表达水平。采用流式细胞仪检测外周血CD4+和CD8+T细胞协同刺激分子ICOS和OX40的表达,B细胞协同刺激分子CD40的表达在各组特发性炎症性肌病及对照人群中的表达水平。结果IIMs各亚组肌肉组织免疫组化染色提示IIMs患者肌肉组织内有明显的炎性细胞浸润,并且CD4+和CD8+T细胞在DM和PM患者肌肉组织中分布是完全不同的,PM患者肌肉组织中主要以CD8+T细胞浸润为主,而DM肌肉组织中主要以CD4+T细胞浸润为主。同时,实验表明阴性对照组患者未见明显炎性细胞浸润。外周血流式细胞仪检测治疗前协同刺激分子提示协同刺激分子在IIMs患者和阴性对照组表达也存在显著差异,与阴性对照组相比,PM患者外周血CD4+和CD8+T细胞ICOS和OX40的表达显著升高,而DM患者外周血B细胞(CD19+细胞)CD40的表达显著升高。进一步对IIMs患者亚组分析提示,PM患者外周血CD4+和CD8+T细胞ICOS和OX40的表达要显著高于DM患者,而DM患者外周血B细胞(CD19+细胞)CD40表达显著高于PM患者。而通过对PM和DM患者治疗前后流式分析提示治疗后原先在PM患者外周血CD4+和CD8+T细胞显著升高的协同刺激分子ICOS和OX40显著下降,同时,在DM患者外周血B细胞(CD19+细胞)显著升高的协同刺激分子CD40也呈现明显下降。结论 1.CD4+T/CD8+T细胞比例在DM和PM患者肌肉组织表达是不同的,DM主要以CD4+T细胞为主,PM主要CD8+T细胞为主。由此可见,CD4+T/CD8+T细胞比例可用于鉴别IIMs患者中DM和PM亚组。2.外周血CD4+和CD8+T细胞协同刺激分子表达在IIMs患者和阴性对照组表达差异提示协同刺激分子参与了 IIMs患者进程,PM患者外周血以CD4+和CD8+T细胞增强ICOS和OX40的表达,DM患者外周血B细胞(CD19+细胞)上调CD40的表达。由此可见,外周血协同刺激分子表达类别也可用于鉴别IIMs患者中DM和PM亚组。而激素治疗后协同刺激分子显著下降也提示IIMs患者协同刺激分子的表达水平也可间接反映出IIMs患者激素治疗的改善程度。