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研究表明骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)可以增强婴儿对感染的抵抗力,但其中的机制仍有待探索。在本实验中,我们以含OPN配方奶粉喂养的仔鼠和普通配方奶粉喂养的仔鼠为对象,研究OPN对免疫细胞发育和功能的影响。出生后7天的仔鼠被随机分为3组,即OPN配方奶粉组(OF)、普通配方奶粉组(RF)和母乳组(BF)。分别给予不同喂养21天后,用流式细胞术分析中枢和外周免疫器官中的T细胞和B细胞亚群,以检查仔鼠免疫系统的发育。用胸腺非依赖性抗原脂多糖(LPS)或胸腺依赖性抗原卵清蛋白(OVA)免疫后,使用间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测LPS或OVA特异性免疫球蛋白的血浆浓度来观察三组仔鼠的免疫应答情况。结果显示OF组外周免疫器官B220+ B细胞和CD3+ T细胞的百分比与RF组相比更较接近BF组。OF组和BF组相比表现出与BF组更加类似的T细胞成熟过程。OF组外周免疫器官中两种主要T细胞亚群即CD4+或CD8+T细胞表现出相同的趋势。通过LPS免疫后,OF、RF和BF组之间的LPS-IgA、IgG和IgM的浓度没有显著差异。OVA免疫后,RF组的OVA-IgA和IgG浓度显著低于BF组,奶粉中添加OPN后可以缓解这一趋势。所以OPN可以影响仔鼠免疫细胞的发育,改善T细胞依赖的体液免疫应答。含有OPN的配方奶粉在功能上比普通配方奶粉更接近母乳。恶性脑胶质瘤是最常见、最具侵袭性的恶性中枢神经系统肿瘤,但是目前仍然缺少有效的治疗方法。受体型蛋白酪氨酸磷酸酶U(Receptor Type Protein Tyrosine Rhosphatase U,PTPRU)是属于PTPs超家族的一种R2B型跨膜受体蛋白。我们先前的研究表明PTPRU对恶性胶质瘤的生长和运动是必需的,但是具体的机制仍有待进一步研究。在本研究中我们利用CRISPR Cas9技术敲除PTPRU基因,建立PTPRU基因表达缺失的稳定胶质母细胞瘤细胞株,从而深入研究该基因影响胶质瘤发生发展的具体机制。我们用张峰实验室的sgRNA设计网站设计PTPRU的目的序列,然后用转染试剂lipo3000将3个分别连接上sgRNA的质粒和含有Cas9的质粒共同转染进U87细胞,随后用Puromycin来筛选出成功敲除PTPRU的单克隆细胞。通过基因测序的峰图,我们可以看到目的序列前后峰图发生了明显的变化,即在目的序列和它的下游出现突变双峰,通过将单克隆检测得到的序列和PTPRU基因的序列进行比对,可以发现目的序列是被敲除的。这些结果表明CRISPR Cas9系统在U87细胞上成功敲除PTPRU基因。为今后利用PTPRU敲除的U87稳定细胞株研究PTPRU在恶性胶质瘤发生发展过程中的作用和机制奠定基础。