论文部分内容阅读
洛克沙胂被用作畜禽的饲料添加剂,在促生长、抗球虫和抗菌等方面应用广泛,但由于洛克沙胂在畜禽饲养过程中的不合理滥用,导致畜禽猪、鸡等的中毒,其残留危害动物性食品安全。本实验以洛克沙胂为研究对象,选择罗曼蛋鸡为动物模型,通过急性、亚急性毒性实验及组织病理变化、血液抗氧化指标、热休克蛋白表达水平的检测,从细胞和分子水平了解洛克沙胂对鸡的中毒作用,为饲料中添加剂的研究提供理论依据。1洛克沙胂对鸡LD50的测定选择7日龄健康罗曼蛋鸡,一次性给各组鸡灌胃洛克沙胂分别100、150、250、300mg/kg,观察鸡死亡情况,以确定最大最小致死剂量;按简化寇氏法计算其等比级数为1.3,确定急性毒性实验各组剂量分别为100、130、169、220、286mg/kg,按照各组剂量给各组鸡一次性灌服。结果显示:洛克沙胂对鸡致死剂量范围在100~250mg/kg内。急性毒性实验测得洛克沙胂对鸡LD50为138.04mg/kg体重,LD50的标准误为0.026,LD50的95%可信限为123.03~158.49mg/kg体重。2洛克沙胂对鸡的临床症状及组织的影响选择7日龄健康罗曼蛋鸡,随机分为4组,每组各40只。根据LD50和日均采食量设计各实验组洛克沙胂剂量,按照0mg/kg(I)、50mg/kg(Ⅱ)、110mg/kg(Ⅲ)和170mg/kg(Ⅳ)剂量组,拌料,饲喂42d。每周周末称体重并统计采食量,测定洛克沙胂对鸡体重的影响,观察临床变化并制作石蜡切片进行组织病理学观察,产生相应的病理变化。结果显示:170mg/kg组洛克沙胂长期应用会造成鸡采食量、体重的降低,便秘、腹泻等症状。110mg/kg(Ⅲ)和170mg/kg(Ⅳ)组的肝脏有明显的炎性细胞浸润,包括淋巴细胞和巨噬细胞。50mg/kg(Ⅱ)、110mg/kg(Ⅲ)和170mg/kg(Ⅳ)的肾脏的肾小管上皮细胞颗粒变性并伴有纤维变化,肾小球萎缩。3洛克沙胂对鸡抗氧化物及热休克蛋白表达水平的影响通过洛克沙胂拌料饲喂,进行亚急性毒性实验的研究,同步开展对抗氧化物及热休克蛋白的研究,测定血清中抗氧化物-超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽抗氧化酶(GSH-Px)活性及脂质过氧化物-丙二醛(MDA)含量。提取肝组织mRNA,反转录成cDNA,引物HSP70:上游:5-AGCGTAACACCACCATTCC-3,下游:5-TGGCTCCCACCCTATCTC-3,进行PCR扩增,检测HSP70的基因表达量。结果显示:洛克沙胂抑制抗氧化物酶的活性,MDA含量在初、中期有明显升高;各染毒组动物肝组织中HSP70mRNA表达呈剂量-效应关系。与对照组相比,高剂量组表达明显增加,差异明显;低剂量组呈微弱表达或不表达,差异不明显。上述表明,洛克沙胂能够引起鸡的肝、肾等组织产生相应的病理变化,为动物性食品安全提供依据;能抑制抗氧化物酶的活性,从而降低机体对自由基引起的疾病的抵抗力;HSP70表达能够敏感的显示机体内砷中毒情况,可作为砷污染早期监测的生物标志物。