目的燕窝为雨燕科(APodidae)金丝燕属(Aerodramus或Collocalia)的多种鸟类分泌的唾液与其羽绒混合凝结而筑成的巢,主产于印度尼西亚、马来西亚、越南、泰国、以及中国的海南、广东等地。燕窝自古以来就是药食皆宜的美味,《本经逢原》谓：“燕窝,甘平无毒,能金水相生,肾气上滋于肺,而胃气亦得而安,今人以之调补虚劳,咳吐红痰”。近年来,随着人民生活水平的提高,越来越多的消费者选择燕窝作为高级滋补品,用于滋阴润肺、护肤养颜、提高免疫力等保健调养。长期以来,燕窝的成分和功效一直缺乏系统研究,2011年浙江省对血燕抽查发现其亚硝酸盐含量超标,血燕产品不合格率高达100%,燕窝的营养功效问题又再次受到广泛的关注和质疑。本课题组基于古代中医对燕窝“滋阴润肺”功效的认识和“肺与大肠相表里”理论,提出“燕窝通过提高肠道免疫进而发挥滋阴润肺功效”的科学假说,研究燕窝对小鼠肠道免疫的影响,并探讨燕窝对肠道免疫系统的影响机制,为阐明燕窝的功效提供科学依据。方法与结果1.燕窝对正常小鼠肠道免疫的影响取BALB/c小鼠随机分为4组,空白对照组、燕窝高剂量(EBNH)、燕窝中剂量(EBNM)、燕窝低剂量组(EBNL)、每日定时经口灌服燕窝溶液共28天,通过测定正常小鼠肠道中sIgA的浓度、派氏结的数目及其T、B淋巴细胞的比例,评价燕窝对正常小鼠肠道免疫的影响。结果显示：燕窝可以使小鼠小肠灌洗液中sIgA含量有一定增加,但与空白对照组无显著性差异；燕窝对正常小鼠肠道中的派氏结数目也无显著影响；燕窝对派氏结中T、B淋巴细胞的比例无显著性影响。2.燕窝对免疫抑制小鼠肠道粘膜免疫功能的影响采用小鼠腹腔注射100 mg/kg的环磷酰胺,造成小鼠免疫抑制模型,通过测定免疫抑制小鼠肠道中sIgA的浓度、派氏结的数目及其T、B淋巴细胞的比例,评价燕窝对免疫抑制小鼠肠道免疫的影响。结果显示：燕窝可以使免疫抑制小鼠小肠灌洗液中sIgA含量显著升高；燕窝低、中、高剂量组对免疫抑制小鼠派氏结的数量无显著影响；燕窝可以降低免疫抑制小鼠派氏结中升高的CD3+细胞比例,升高CD19+细胞比例。3.燕窝对正常小鼠肠道菌群的影响KM种小鼠随机分为4组,正常对照组,燕窝高、中、低剂量组。灌胃给药28天后,选用厌氧及需氧菌选择性培养基测定盲肠内容物标本中代表性菌种：肠杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌、拟杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌菌群数量。结果显示：与空白组相比,燕窝各剂量组小鼠肠道肠杆菌含量明显降低(P<0.01)或(P<0.05)；燕窝高剂量组产气荚膜梭菌含量显著下降(P<0.05)；燕窝中、高剂量组肠球菌含量显著下降(P<0.05)或(P<0.01)；燕窝中、高剂量组小鼠拟杆菌含量显著增加(P<0.05)；燕窝高剂量组双歧杆菌、乳酸杆菌含量显著上升(P<0.05)。4.燕窝对小鼠T、B淋巴细胞增殖活化的影响采用CCK-8法研究燕窝对淋巴细胞增殖的影响；采用双色荧光染色结合流式细胞术检测燕窝对小鼠T、B淋巴细胞早、中、晚期活化的影响；采用CFDA-SE染色法研究燕窝对T、B淋巴细胞增殖的影响。CCK-8法结果显示燕窝各剂量组均可显著促进小鼠淋巴细胞的增殖；燕窝对小鼠T、B淋巴细胞增殖活化的影响结果显示：燕窝各剂量组对T淋巴细胞的早、中、晚期活化无显著性影响；燕窝各剂量组对T淋巴细胞的增殖无显著性影响；燕窝可以促进B淋巴细胞的早、中、晚期活化；燕窝各剂量组可显著促进小鼠B细胞的体外增殖。5.显色基质法检测燕窝中内毒素的含量,并利用多粘菌素B(polymyxin B)排除燕窝中的内毒素对小鼠B淋巴细胞的增殖作用影响利用显色基质法检测燕窝中内毒素的含量,显色基质法检测燕窝中内毒含结果显示：燕窝中内毒素含量为4.3 ×103 (EU/ml)。多粘菌素B(polymyxin B)排除燕窝中内毒素对小鼠B淋巴细胞的增殖作用影响结果显示：加入polymyxin B后,燕窝低、中、高剂量组对小鼠B淋巴细胞依然有显著的促增殖的作用,提示燕窝对B淋巴细胞的活化增殖作用不是来自其中含有的内毒素,而是来自燕窝中的其它成分。6.燕窝对小鼠淋巴细胞产生的免疫球蛋白的影响将燕窝提取液与小鼠淋巴细胞共同培养后,收集上清,用Cytometric Bead Array法测定燕窝对小鼠淋巴细胞产生的免疫球蛋白的影响。结果显示：燕窝可显著促进IgE. IgA、IgM、IgG3抗体的分泌,但对IgG1、IgG2a、IgG2b抗体的分泌无影响。结论本文首次发现燕窝可显著抑制环磷酰胺诱导的小鼠的肠道sIgA分泌减少,调节环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠派氏结内T、B淋巴细胞的比例改变。并可显著升高小鼠肠道内拟杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌等益生菌；显著抑制肠杆菌、产气荚膜梭菌等有害菌,发挥对肠道免疫的调节作用。通过对小鼠B淋巴细胞体外活化、增殖的影响研究发现,燕窝可以显著促进小鼠B淋巴细胞体外的活化、增殖及抗体的分泌。通过上述实验证实,燕窝可显著减轻环磷酰胺对小鼠肠道的免疫抑制作用,燕窝对B淋巴细胞的增殖、活化、促抗体分泌作用可能是其提高肠道免疫的作用机制。根据现代学者对“肺与大肠相表里”理论的新认识,认为呼吸道粘膜与胃肠道粘膜都是公共粘膜的组成部分,两者通过淋巴细胞的归巢建立联系。本论文的实验结果表明,燕窝对小鼠B淋巴细胞有促进活化和增殖的作用,增殖后的B细胞通过淋巴细胞的“归巢再循环”使得肠粘膜与呼吸道粘膜建立联系,可能是燕窝通过影响肠道免疫进而发挥“滋阴润肺”功效的机制之一。此外,sIgA被认为是机体各处粘膜建立联系的物质基础,而本文发现燕窝对免疫抑制小鼠肠道sIgA的分泌有促进作用。通过物质基础："sIgA"使得肠道粘膜和呼吸道粘膜建立了联系,可能是燕窝通过影响肠道免疫进而发挥“滋阴润肺”功效的另一种机制。由此可见“燕窝通过提高肠道免疫进而发挥滋阴润肺功效”的科学假说是成立的。