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目的乙型肝炎病毒(HBV)感染是人类肝硬化和肝细胞癌最主要的危险因素。本研究通过小鼠尾静脉高速大量注射含有HBV全基因组真核表达质粒制作HBV感染模型,并注射HBV siRNA,检测其干扰效果,为进一步研究其干扰与免疫效应机制奠定基础。方法1.通过小鼠尾静脉高速大量注射含有HBV全基因组真核表达质粒制作HBV感染模型,处理后第四天,分别用量效关系,时效关系和三种成像系统观察质粒pGenesil– hk的GFP表达,验证模型建立是否成功。2.采用时间分辨荧光法检测siRNA干扰前后的小鼠血清中分泌型乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg),肝细胞总RNA采用实时荧光定量PCR检测,肝组织免疫组织化学检测HBcAg。结果1.小鼠HBV感染模型的建立通过小鼠尾静脉高速注射HBV表达质粒后4天,定量检测HBsAg和HbeAg结果表明随着pBlue-HBV的量逐渐增加,HBeAg的量随之上升;肝脏细胞进行流式细胞术从2到9天均有不同程度的表达,第3到5天是表达高峰期。体内成像结果显示小鼠肝脏有绿色荧光表达,而正常小鼠则未见荧光信号。由此,我们可以确定高压水动力注射法建立HBV感染小鼠模型,肝脏大量表达HBV,血清?中检测到HBsAg和HBeAg,且于3到5天为表达高峰,可持续约10天。2.HBV siRNA的干扰效果Realtime PCR的结果表明siRNA组则明显抑制HBsAg和HBeAg的表达。说明所构建的siRNA体内在mRNA水平有效地抑制HBV的表达;时间分辨荧光法检测结果提示,pGenesil-1和pGenesil-2组HBsAg和HBeAg表达明显下降,说明siRNA能够有效抑制HBV相关抗原的表达,进一步免疫组化检测的结果表明未干扰组可见有较多阳性细胞,而在pGenesil-1和2组则几乎未见阳性细胞,说明siRNA可有效抑制HBcAg的表达。结论通过高压水动力注射法成功建立HBV感染小鼠模型,肝脏大量表达HBV,血清中检测到HBsAg和HBeAg。同样方法注射HBV siRNA体内能够有效抑制HBV相关mRNA及其抗原的表达,以及肝细胞内HBcAg的表达,为进一步体内靶向干扰与免疫效应机制研究奠定了基础。