【摘 要】
:
抗菌药在畜禽养殖生产中的大量使用,使得动物体及养殖场周围环境中的抗生素耐药菌日益增加,对人类健康和公共卫生安全造成威胁。氮循环是生态系统中重要的物质循环之一,抗菌药在环境中的残留一定程度上阻碍氮循环进程,进而影响氮素平衡,扰乱环境微生物群落的功能代谢。本文立足此背景,分别构建了氟苯尼考(FFC)-粪便-土壤模型与磺胺二甲嘧啶(SM2)-沉积物模型,通过30 d的短期孵育试验,研究不同浓度抗菌药添加
【基金项目】
:
国家自然基金(31772803); 广东省自然科学基金(2016A030311029);
论文部分内容阅读
抗菌药在畜禽养殖生产中的大量使用,使得动物体及养殖场周围环境中的抗生素耐药菌日益增加,对人类健康和公共卫生安全造成威胁。氮循环是生态系统中重要的物质循环之一,抗菌药在环境中的残留一定程度上阻碍氮循环进程,进而影响氮素平衡,扰乱环境微生物群落的功能代谢。本文立足此背景,分别构建了氟苯尼考(FFC)-粪便-土壤模型与磺胺二甲嘧啶(SM2)-沉积物模型,通过30 d的短期孵育试验,研究不同浓度抗菌药添加对沉积物、土壤两种生境中氮循环进程及其抗生素耐药性的影响。总的来说,这些研究结果为抗菌药胁迫下的环境微生物生态学提供了一个较详细的视角。同时为养殖场合理使用兽用抗菌药提供理论指导,也为评估抗菌药引发微生物耐药性导致的环境生态风险提供参考数据。取得的主要研究结果如下:(1)FFC胁迫下土壤中氮循环及ARGs响应特征以FFC为胁迫因子,构建室内粪便-土壤模型,分别设空白组(0μg/kg)、低浓度药物组(0.167μg/kg)和高浓度药物组(16.67μg/kg),每组重复三次。分别于第1、3、7、14和30 d进行样品采集。采用宏基因组学和q PCR等技术分析FFC对土壤微生物耐药性和氮循环进程的影响。结果显示:低浓度FFC对土壤氮循环功能基因抑制范围广,而高浓度FFC抑制程度较大。此外,高浓度FFC明显提高土壤中flo R、fex B、fex A耐药基因的丰度。FFC诱导了土壤微生物呈现不同的耐药图谱,表现在初期(1~3 d)部分优势ARGs类型丰度发生显著变化,且不同程度地改变了sul1、sul2、tet(M)、optr A四种优势耐药基因宿主菌的分布模式。研究还发现了高浓度FFC显著改变变形菌、放线菌、拟杆菌和厚壁菌菌群丰度,其中明显降低鞘脂单胞菌科中各类菌属丰度。值得注意的是,有机质是影响土壤优势菌属分布的主导因素。FFC可降低蛋白质代谢功能,并影响大部分氮代谢功能;在氮代谢通路中,NO还原酶在FFC的胁迫下较敏感于其它酶,相关酶包括硝酸盐还原酶、亚硝酸盐还原酶和一氧化二氮还原酶亦呈现轻度响应。此外,FFC对携带氮循环基因丰度较高的菌属的影响随孵育时间延长而发生变化。(2)SM2胁迫下水体沉积物中氮循环及ARGs响应特征以SM2为胁迫因子,构建室内水体模型,分别设空白组(0μg/L)、低浓度药物组(50μg/L)和高浓度药物组(1000μg/L),每组重复三次。于第1、3、5、7、10 h和第1、3、7、15、30 d进行沉积物样品采集。采用q PCR与16S r RNA基因高通量测序分析SM2对沉积物中微生物耐药性与氮循环进程的影响。结果显示:SM2抑制了水体沉积物中的硝酸盐还原量,表现在30 d孵育末期,低浓度和高浓度SM2水平下分别被抑制26%和21%。在30 d孵育末期,高浓度SM2显著增加了沉积物中sul2基因的相对丰度(ANOVA test at Tukey HSD,P<0.05)。药物与空白处理对水体沉积物中反硝化、硝酸盐异化还原成铵(DNRA)功能基因丰度的影响表现在:DNRA功能基因nrf A、反硝化功能基因nos Z和nar G在药物组与空白组中的差异随孵育时间延长而下降,30 d后变化不显著;反硝化功能基因nir K丰度则随时间延长而增加,至30 d呈现显著差异。16S r RNA基因高通量测序显示空白组的物种丰富度与多样性均高于SM2组。优势菌群如放线菌、广古菌、芽单胞菌、硝化螺旋菌、伯克氏菌和Thermoanaerobaculaceae的相对丰度在孵育期间药物组均低于空白组。相关性分析表明:沉积物中多种氮循环基因与磺胺类耐药基因密切相关,磺胺耐药基因主要选择intl1在细菌群落间发生水平转移。此外,放线菌、拟杆菌、蓝藻细菌、ε-变形菌、广古菌、厚壁菌、芽单胞菌、螺旋体、红环菌、SC-I-84、互营菌和Thermoanaerobaculaceae在氮转化进程中扮演着重要的角色。综上所述,兽用抗菌药进入菜地土壤、水体沉积物,均会引起抗生素耐药性增强,主要体现在特定耐药基因亚型丰度变化显著。ARGs在宿主菌的定植随时间变化,造成环境样品随时间延长呈现不同的耐药图谱。功能基因携带宿主菌的同时也会携带耐药基因参与整个氮循环。此外,抗菌药在土壤与沉积物中的残留造成活性氮积累、部分氮循环功能基因丰度下降、氮循环宿主分布紊乱、氮功能代谢减弱现象。
其他文献
胸腺是机体重要的免疫器官,是胸腺细胞分化和T细胞发育成熟的场所。胸腺随着年龄的增加而不断增大直至性成熟时达到高峰,随后就开始发生萎缩和退化。胸腺的退化严重影响胸腺的形态和功能。免疫系统的衰老,尤其是胸腺退化,是老年群体免疫力下降、疫苗接种效果差、癌症患病几率升高等的主要原因。然而,所幸的是,胸腺是有再生潜力的。有研究表明,胸腺在性成熟后发生退化的主要原因可能是由于高水平的循环性激素的变化所引起的。
猪非典型瘟病毒(Atypical porcine pestivirus,APPV)是一种能够引起仔猪先天性震颤(Congenital tremor,CT)的新发现病毒,属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)。发病仔猪主要表现为肌肉震颤,行走困难,常因吮乳不足而死亡。自报道以来,APPV在世界范围内广泛流行,给养猪业带来了巨大的经济损失。迄今为止,仍然缺乏对该病毒有
磷霉素对多重耐药革兰氏阴性菌具有良好抗菌活性,且具有较低的耐药率而受到人们的重视。尽管磷霉素在我国没有批准用于动物,但在肠杆菌尤其是大肠杆菌已出现磷霉素耐药菌,fos A3自发现以来已成为我国动物源肠杆菌尤其是大肠杆菌中最为流行的质粒介导的磷霉素类耐药基因。鸽子作为食品动物,虽然对抗菌药物的使用有所限制,仍被认为是细菌的潜在储存库,可能对人类公共健康造成威胁。本研究从广东省佛山市某鸽场采集鸽子及环
猪非典型瘟病毒(atypical porcine pestivirus,APPV)是新近发现能引起仔猪先天震颤(congenital tremors,CT)的病原体。2015年,美国首次在先天性震颤的猪群中发现了APPV,本课题组于2016年在我国猪群中首次检测到APPV的感染,并分离获得了APPV GD1、GD2和GD3毒株。APPV广泛分布于欧洲、亚洲和美洲的重要养猪国家,造成了巨大的经济损失
胚胎着床是处于活化状态的胚泡与处于接受态的子宫相互作用,并建立紧密的物理和生理联系的过程,是哺乳动物妊娠过程中最关键的步骤之一。如果着床失败,胚胎将无法继续发育,并最终导致妊娠的失败。先前的研究表明,Pgr-Cre介导的子宫上皮和基质特异性过表达Notch1-ICD(N1ICD)导致小鼠不孕,并且该小鼠子宫中没有腺体,但子宫腔上皮细胞中表达子宫内膜腺上皮的标志性分子Foxa2以及腺体的主要分泌物L
禽流感病毒(Avian influenza virus,AIVs)是引起鸟类和人等哺乳动物感染或致病的一种病原体,其严重危害家禽业,并严重威胁人类健康。禽流感病毒根据其对鸡的致病性分为低致病性禽流感病毒(Low pathogenic avian influenza viruses,LPAIVs)和高致病性禽流感病毒(Highly pathogenic avian influenza viruses
密集的遗传选择造成肉鸡脂肪沉积,减少不必要的脂肪沉积是优质肉鸡选育过程中一个亟需解决的关键问题。本实验以广西三黄鸡(N409)群体的腹脂组织为研究材料,抽取两尾样的腹脂组织RNA进行m RNA和micro RNA测序分析,得到了大量差异表达的m RNAs和micro RNAs。对这些差异的m RNA和micro RNA靶基因进行GO功能注释和pathway通路分析,发现差异基因和差异mi RNA的
胚胎着床的成功需要胚胎发育到胚泡期的同时,子宫内膜建立接受态。胚胎着床后子宫开始蜕膜化过程,但这个过程的调节机制目前仍不清楚。尿酸结晶是内源性诱导无菌炎症的重要分子之一。细胞内嘌呤代谢产生高浓度的尿酸,一旦细胞破裂尿酸就会释放至细胞外,与钠离子结合形成尿酸钠结晶,刺激炎症反应。本实验采用免疫荧光和小鼠假孕模型检测了尿酸结晶在小鼠正常妊娠和人工诱导蜕膜化子宫中的定位;利用碱性磷酸酶染色、实时定量PC
抗生素耐药基因(Antibiotic Resistance Genes,ARGs)污染目前已成为全球关注的热点问题。抗生素耐药细菌(Antibiotic Resistance Bacteria,ARB)携带的ARGs会随着宿主细菌在环境中扩散和传播,而养殖业被认为是环境中ARGs增加的主要原因。目前我国猪场及其周边环境中ARGs的流行及分布的数据缺乏,因此本研究利用高通量荧光定量PCR技术,调查我