论文部分内容阅读
研究目的利用乙酰胆碱受体阻断剂阿托品制作小鼠胃排空障碍模型,给予姜黄素预先灌胃,探讨姜黄素减轻小鼠胃排空障碍的作用是否与乙酰胆碱(Acetylcholine,ACh)、一氧化氮(Nitric Oxide,NO)以及调控胃慢波节律蠕动的卡介间质细胞(Interstitial cells of Cajal,ICCs)改变有关,初步探索姜黄素的作用机制。研究方法健康昆明种雄性小鼠36只,体重在18~20 g,分为对照组、姜黄素组、阿托品组、姜黄素+阿托品组,每组9只。姜黄素组、姜黄素+阿托品组给予姜黄素(200 mg/kg)混悬液灌胃,每天0.2 ml,共15天,其余组给予等量溶媒溶液灌胃作为对照。实验结束后,小鼠禁食24 h并自由饮水。在脊髓脱臼处死小鼠前40 min,阿托品组和姜黄素+阿托品组腹腔注射阿托品(0.5 mg/kg)一次。其余组用生理盐水腹腔注射作为对照。在腹腔注射20 min后,各组小鼠均给予0.8 ml亚甲蓝混悬液灌胃一次,20 min后脱臼处死小鼠,测定各组胃排空率。取部分胃体组织测定乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,ACh E)活力、NO含量、总一氧化氮合酶(Total Nitric Oxide Synthase,TNOS)、诱导型一氧化氮合酶(inducible Nitric Oxide Synthase,i NOS)的活力;再取一部分胃体组织提取总m RNA,运用荧光定量RT-PCR检测ACh E、乙酰胆碱受体(Acetylcholine Receptor,ACh R)、以及特异性反映ICCs的酪氨酸激酶受体(c-kit)及其配体干细胞生长因子(Stem Cell Factor,SCF)的m RNA表达量;运用蛋白质印迹法检测ACh E在蛋白水平的表达。实验结束后,实验数据应用SPSS17.0软件进行统计学处理,计量资料用均数±标准差(?)表示,运用单因素方差分析,在各组数据符合正态分布且方差齐的条件下,对各组间进行统计学差异比较,组与组之间两两比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果阿托品组(37.77±8.12)与对照组(68.94±10.96)相比胃排空率明显降低(P<0.01)。阿托品组小鼠胃组织ACh E活力(0.49±0.15)与对照组(0.77±0.14)相比显著降低(P<0.01),其ACh E蛋白表达(1.05±0.21)也低于对照组(0.57±0.16)(P<0.01),ACh E m RNA表达(0.58±0.12)同样低于对照组(1.00±0.15)(P<0.01)。阿托品组小鼠ACh R m RNA的表达(0.74±0.21)与对照组(1.00±0.20)相比也降低(P<0.05)。阿托品组c-kit(0.54±0.07)、SCF(0.58±0.17)m RNA表达量与对照组的c-kit(1.00±0.11)、SCF(1.00±0.09)m RNA表达量相比显著降低(P<0.01)。阿托品组胃组织NO含量和TNOS、i NOS活力(分别为10.27±2.53,40.54±6.25,32.41±9.74)与对照组(10.65±2.89,45.92±5.60,30.41±5.01)相比均无显著性差异(P>0.05)。与阿托品组相比,姜黄素+阿托品组小鼠胃排空率明显提高(63.75±9.08)(P<0.01);ACh E活力(0.72±0.10)、ACh E蛋白(0.84±0.22)和m RNA(0.82±0.19)相对定量均有所增高(P<0.01);ACh R m RNA(0.98±0.25)表达量也有所升高(P<0.05);胃组织中c-kit(0.76±0.14)及其配体SCF(0.81±0.22)m RNA表达量均显著改善(P<0.05)。单用姜黄素组与对照组相比,上述所有指标均无显著性差异(P>0.05)。结论阿托品除了通过阻断ACh与其受体结合,还引起胃组织ICCs功能减弱,造成胃排空障碍。姜黄素预先灌胃后一方面通过促进ACh释放,增加ACh R表达,增加ACh的功能,另一方面通过增强ICCs的慢波启动功能,促进胃排空,从而改善阿托品引起的胃肠蠕动障碍。意义为将来姜黄素在临床中治疗胃运动障碍性疾病提供理论依据。