【摘 要】
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目的：重组神经营养素3基因，在面神经损伤模型作肌肉真核表达，为治疗神经损伤打下科研基础。 方法：利用蛋白酶K裂解法从外周血中获取健康人基因组DNA，采用PCR方法从中扩增出编码
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目的：重组神经营养素3基因，在面神经损伤模型作肌肉真核表达，为治疗神经损伤打下科研基础。 方法：利用蛋白酶K裂解法从外周血中获取健康人基因组DNA，采用PCR方法从中扩增出编码神经营养素3全长基因，然后与线形克隆载体pMD18-T连接，并将其亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)；大量制备并纯化重组质粒pcDNA3.1(+)-NT-3；离断大鼠两侧面神经的下颌缘支和颊支的主干，制备面神经损伤模型。用微量注射器将DC-Chol和pcDNA3.1(+)-NT-3混合物直接注射到大鼠的右侧(实验侧)面神经切断处神经所支配的肌肉内，左侧(对照侧)只注射DC-Chol和pcDNA3.1(+)混合物。在转基因后，观察大鼠触须拂动恢复情况。第7天，采用RT-PCR技术检测转基因处肌肉的NT-3基因表达。 结果：PCR扩增出一约780bp的DNA片段：将重组质粒pMD18-NT-3、pcDNA3.1(+)-NT-3分别作HindⅢ和EcoRⅠ双酶切，都能得到一个大小与PCR扩增产物一致的插入片段；测序结果表明：NT-3基因与Genbank中基因序列高度符合，同时表示NT-3基因的克隆和亚克隆均成功；经脂质体DC-Chol介导NT-3基因转染到大鼠损伤的面神经所支配的肌肉，第7天检测出肌内有NT-3基因mRNA的表达，而对照侧未检测到NT-3基因mRNA的表达。第8天后，实验侧大鼠触须出现拂动，至14.6(13～16)天大鼠的触须的节律性拂动的基本恢复正常；而对照侧大鼠的触须在29.4(28～31)天开始拂动，仍倒向尾侧。 结论：本研究成功地扩增了NT-3基因，并亚克隆至真核表达载体；经脂质体安徽医科大学硕士学位论文DC一Chol介导NT一3基因转染到大鼠损伤的面神经所支配的肌肉，该肌肉可有效地被转染并表达NT书基因，大鼠实验侧的触须拂动比对照侧提前开始恢复。表明:阳离子脂质体DC一Chol介导NT一3基因肌内转基因治疗损伤面神经的方法是可行的。这将为阳离子脂质体DC一Chol介导外源性NT一3基因转染受损神经支配的肌内，治疗周围神经损伤打下了良好的基础。
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