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以成熟的黑果腺肋花楸果实为试验原料,研究了黑果腺肋花楸花色苷的提取、纯化,并对其花色苷的组成进行了结构鉴定。以清除DPPH·的能力、清除OH·的能力、总还原能力(FRAP法)、抑制脂质过氧化能力四个指标对花色苷粗提物(CA)、一次纯化物(OP)、二次纯化物(SP)、固相萃取高纯度花色苷(PA)进行了体外抗氧化活性试验。对花色苷粗提物(CA)、一次纯化物(OP)、二次纯化物(SP)、固相萃取高纯度花色苷(PA)进行了体外消化模拟试验,测定了花色苷和总酚含量的变化,以清除DPPH·的能力和抑制脂质过氧化能力为指标分析了体外消化模拟前后花色苷抗氧化活性的变化。 以黑果腺肋花楸花色苷得率为考察指标,分别用水,50%、60%、70%、80%、90%、100%的乙醇和50%、60%、70%、80%、90%、100%的甲醇作为溶剂提取黑果腺肋花楸花色苷,得出80%乙醇为较好的提取溶剂。以80%乙醇为提取溶剂,进行提取时间、料液比、pH值、提取温度4个单因素试验。在单因素试验基础上,运用Box-Behnken响应面设计建立数学模型。结果表明最佳提取条件为:提取时间110 min、pH值2、提取温度34℃、料液比1︰16.5,黑果腺肋花楸花色苷得率为6.648 mg/g。通过静态吸附和解吸筛选出黑果腺肋花楸花色苷的最佳纯化树脂为AB-8,最佳纯化条件为上样浓度2 mg/mL,径长比1︰25,用2.2 BV、pH值2的80%乙醇以2.0 BV/h的流速洗脱,花色苷纯度提高11.5倍。以10%~90%的不同浓度的乙醇溶液将得到的一次花色苷纯化物进行洗脱,试验结果表明聚酰胺为填料,洗脱剂浓度80%洗脱得到的花色苷纯度最高为55.33%,二次纯化花色苷纯度比粗提物提高了44.264倍,比一次纯化花色苷纯度提高3.864倍。Waters Oasis? MCX阳离子交换柱进行固相萃取,花色苷回收率达到95.3%,纯度达到92.34%。结构鉴定可知黑果腺肋花楸中含有四种花色苷,分别为:矢车菊素-3-半乳糖苷、矢车菊素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-阿拉伯糖苷、矢车菊素-3-木糖苷。 黑果腺肋花楸花色苷提取液清除DPPH·的能力、清除OH·的能力和总还原能力有一致的趋势,总体上表现出:二次纯化物>粗提物>一次纯化物>Trolox。同一柱填料洗脱下来的花色苷样品,其DPPH·的能力、清除OH·的能力和总还原能力与其纯度之间呈现正相关关系。不同柱填料洗脱下来的花色苷样品其DPPH·的能力、清除OH·的能力和总还原能力与其纯度之间呈现微弱正相关但是不显著。抑制脂质过氧化的能力总体上表现出:粗提物>二次纯化物>一次纯化物>Trolox。与清除DPPH·的能力、清除OH·的能力和总还原能力不同,相同的柱填料梯度洗脱下来的花色苷样品,抑制脂质过氧化能力与其纯度之间并不呈现正相关关系。以聚酰胺为柱填料,洗脱液乙醇浓度为80%的洗脱样品对DPPH·的清除能力是最强的,清除率为64.77%,IC50为25.46±0.66μg/mL。以D101为柱填料,洗脱液乙醇浓度为80%的洗脱样品总还原能力是最强的,Fe2+当量为0.061mmol/L,IC50为0.86±0.031mol/L。以AB-8为柱填料,洗脱液乙醇浓度为80%的洗脱样品对OH·的清除能力最强,其清除率为62.76%,IC50为0.21±0.0195mg/mL。以聚酰胺为柱填料,洗脱液乙醇浓度为60%时对脂质过氧化的抑制作用最强,其抑制率为93.29%,IC50为3.34±0.29μg/mL。 体外消化模拟过程中,模拟胃消化后花色苷、总酚含量变化不大而模拟肠消化后总酚和花色苷大量损失。粗提物、一次纯化物、二次纯化物(聚酰胺洗脱)、高纯度花色苷(固相萃取)样品中花色苷分别损失了59.28、61.57%、66.03%、74.33%。粗提物、一次纯化物、二次纯化物(聚酰胺洗脱)、高纯度花色苷(固相萃取)样品中总酚分别损失了32.06%、35.26%、45.93%、70.76%。体外消化模拟后高纯度花色苷(PA) DPPH·清除能力和抑制脂质过氧化的能力几乎无变化,说明胃肠消化过程中花色苷虽然大量损失,但是残留的花色苷活性并未受影响。模拟胃消化后花色苷粗提物(CA)、一次纯化物(OP)、二次纯化物(SP)DPPH·清除能力和抑制脂质过氧化的能力变化不大,在模拟肠消化过程后明显减弱。