一株产普鲁兰酶菌的筛选鉴定及其酶学活性研究

来源 :泰山医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Nuangfeng0915
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本研究利用平板稀释涂布法从山东各地的面粉厂和淀粉加工厂附近采集的样品中分离得到了20株产普鲁兰酶的菌株,通过唯一碳源普鲁兰多糖,进一步筛选得到了一株产酶能力较强的菌株。通过观察菌株生长形态、菌落特征、以及相应的生理生化鉴定实验和16s rDNA的同源性分析,对菌株的系统归类作出了判断:此菌株为革兰氏阳性杆菌,菌体呈椭圆形或短杆状,并具有有运动性。单菌落形态为灰白色或白色有时会略显微黄色,较粘稠,边缘整齐但有凸起、表面平整且没有其他色素的分泌,生理生化鉴定实验的结果表明,各项指标与枯草芽孢杆菌相似,由16s rDNA序列分析确定该菌株的序列与枯草芽孢杆菌的亲源性最高,综合以上各项鉴定指标判定该菌为一株枯草芽孢杆菌。以产酶量为衡量标准,DNS法为测量方试,通过多项单因素实验,对发酵培养基的配方及比例和发酵条件进行了优化,优化后的培养基的配方和发酵条件为:可溶性淀粉15.0g,蛋白胨10.0g,硫酸铵5.0g,磷酸二氢钠1.0g,定容至1000mL,pH值调节为5,发酵温度为37℃,摇床转速设置为200rpm,接种量为1%(发酵三角瓶为50mL,装液量为20mL)优化后产酶水平为4.3U/mL。菌株的发酵液经过高速离心,上清液通过冷冻干燥浓缩后,硫酸铵盐析沉淀,再经过透析,强阴离子柱层析等一系列分离纯化步骤之后,纯化后的酶活力是9.3 U/mL与纯化前的相比纯化倍数提高了两倍多。对纯化后的酶蛋白用SDS-PAGE法确定酶的分子量为70kD左右,随后对酶的性质做了一系列的探索,结果显示:该酶在55℃时,酶活力达到峰值,其耐热性较差,酶溶液在55℃保温后60 min,相对酶活力只有原来的64%。该酶最适作用pH在6.2左右,在pH5.4保持较稳定的活性,保温90 min,活性依旧在63%左右。K+,Ba2+,Zn2+,Na+对酶的活力明显的促进作用,Cu2+,Ga2+,Mg2+,Sn2+,Fe2+,Cd2+有不同程度的抑制作用。
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