【摘 要】
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乳酸菌在人体肠道内充当一个重要角色,在促进免疫调节、增强人体对肠道感染的抵抗能力、减少腹泻、帮助生成维生素、以及增强对钙、铁、钾的吸收等方面发挥着很大的作用。但是乳酸菌发挥有益作用需要一种重要的黏附因子—S-层蛋白。酸奶中含有的嗜酸酸杆菌和双歧杆菌的表层S-层蛋白的含量对人体的益生作用具有明显的影响。为此,定量检测S-层蛋白的含量具有重要意义。当前对于蛋白质的检测主要集中在凯氏定氮法、双缩脲法、考
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乳酸菌在人体肠道内充当一个重要角色,在促进免疫调节、增强人体对肠道感染的抵抗能力、减少腹泻、帮助生成维生素、以及增强对钙、铁、钾的吸收等方面发挥着很大的作用。但是乳酸菌发挥有益作用需要一种重要的黏附因子—S-层蛋白。酸奶中含有的嗜酸酸杆菌和双歧杆菌的表层S-层蛋白的含量对人体的益生作用具有明显的影响。为此,定量检测S-层蛋白的含量具有重要意义。当前对于蛋白质的检测主要集中在凯氏定氮法、双缩脲法、考马斯亮蓝法等方法。这些方法虽然操作简单、可重复使用,但是这些方法灵敏度低、耗时长、成本高、特异性差。为了能够精确高效检测S-层蛋白,本论文构建了三种高灵敏的电化学免疫传感器,成功实现了对S-层蛋白高效、定量检测。该传感器兼具电化学分析技术与免疫分析技术的优势,具有灵敏度高、选择性好、样品前处理简单等优点。具体内容如下:第一章:本章概述了 S-层蛋白的性质以及功能。并对目前蛋白质检测方法的优缺点进行了阐述。最后,讲述了纳米材料在电化学免疫传感器中的应用以及本论文的选题依据和主要研究内容。第二章:本章制备了石墨烯-壳聚糖复合物,并研制了一种S-层蛋白单抗/石墨烯-壳聚糖电化学免疫传感器,将其应用于S-层蛋白的检测。结果显示,在0.2~2000 ng/mL范围内,相关系数R值达到了 0.9951,最低检测限达到了 0.03 ng/mL,说明该传感器对S-层蛋白的检测表现出很好的线性关系和很高的灵敏度。将该传感器应用于实际样检测,检测结果表明实际样中S-层蛋白的实际含量为1.44mg/mL。第三章:本章节利用聚多巴胺(PDA)的优异性将S-层蛋白单抗化学修饰到电极表面,制备了一种S-层蛋白单抗/聚多巴胺/石墨烯-壳聚糖电化学免疫传感器。结果显示,在0.2-5000 ng/mL范围内,相关系数R值达到了 0.9948,最低检测限可达0.02 ng/mL,说明该传感器对S-层蛋白的检测表现出很好的线性关系和很高的灵敏度。将该传感器用于实际样检测,检测结果表明含有S-层蛋白的实际含量为1.29 mg/mL。第四章:本章利用电化学沉积的方法将纳米金修饰在玻碳电极表面,然后通过金氨键将聚多巴胺(PDA)修饰在纳米金表面,最后将S-层蛋白单抗修饰在聚多巴胺上,制备了一种S-层蛋白单克隆抗体/聚多巴胺/纳米金电化学免疫传感器。实验表明,在0.2~5000 ng/mL范围内,相关系数R值达到了 0.9980,最低检测限可达0.01 ng/mL,说明该传感器对S-层蛋白的检测表现出很好的线性关系和很高的灵敏度。利用该传感器对实际样进行检测,结果显示含有S-层蛋白的实际含量为1.84 mg/mL。
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