肿瘤细胞通常会过表达多种受体，利用这些受体研制专门针对肿瘤细胞的靶向制剂，增强药物对靶器官的特异性治疗，从而降低药物对患者的毒副作用，这些受体是最早作为特异性治疗肿瘤的靶向目标。促黄体激素释放激素（LHRH）是在下丘脑-垂体-性腺轴调节方面发挥重要作用的一种性腺激素。LHRH作用的发挥主要依赖于该受体的存在。LHRH-R最早发现于垂体，随着研究者对LHRH的深入认识，逐渐了解到起源于一些与生殖系统无关器官的肿瘤，如肺癌、肝癌和肾癌等都有促黄体激素释放激素受体（LHRHR）过表达，并且LHRH及其类似物可以通过LHRHR的介导作用影响这些肿瘤的生长和发育。　　肿瘤与LHRHR的表达有一定的关联性，许多肿瘤组织和细胞表面过度表达LHRHR。利用LHRH类似物为导向的抗肿瘤药物在治疗LHRHR阳性的肿瘤中，发现肿瘤组织上LHRHR可作为一种新颖分子候选物，也可作为诊断和治疗癌症的重要靶标。尽管许多研究者发现以LHRH及其类似物为导向的抗肿瘤药物可以通过LHRHR介导抑制癌细胞增殖，但LHRHR在肿瘤的生长和发展中的作用机制尚不清楚。　　本课题主要检测多种肿瘤细胞中LHRHR表达水平，并以激动剂（LHRH）和拮抗剂（LHRH受体的单克隆抗体，4F3B10）体外作用于宫颈癌HeLa细胞，检测细胞增殖和周期变化，并利用转录组学技术研究HeLa细胞中LHRHR的作用机制。　　采用反转录实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测多种肿瘤细胞中LHRH受体mR-NA的相对表达量，并利用蛋白免疫印迹实验进行鉴定；采用CCK-8试剂法和流式细胞术检测激动剂LHRH和拮抗剂4F3B10对HeLa细胞增殖和细胞周期的影响；采用基因表达谱芯片筛选激动剂LHRH和拮抗剂4F3B10分别作用HeLa细胞后差异基因，并通过生物信息学分析差异基因之间的联系；Q-PCR对基因芯片的结果进行验证，免疫蛋白印迹实验鉴定四个差异蛋白表达水平的变化。　　多种肿瘤细胞中LHRH受体相对表达量检测结果显示，与阴性对照T细胞淋巴瘤HUT-102相比，其他4种细胞中LHRH受体基因表达量均相对较高，其中HeLa细胞中LHRH受体相对表达量比其他细胞显著提高（P＜0.05）；免疫蛋白印迹实验鉴定结果显示，除阴性对照HUT-102细胞电泳道无蛋白印记条带，其他四种细胞均有条带，但是蛋白表达水平略有不同，其中HeLa细胞中LHRH受体蛋白表达量较其他四种肿瘤细胞高。　　CCK-8试剂盒检测结果显示，在一定浓度范围内，激动剂LHRH作用细胞48h后发现，随着激动剂浓度增加，细胞的存活率明显增加（P＜0.05）。拮抗剂4F3B10作用于HeLa细胞48h后，随着拮抗剂浓度增加，细胞存活率显著降低（P＜0.05）。其中LHRH最佳作用浓度为40μg/mL（P＜0.01）和4F3B10最佳作用浓度为40μg/mL（P＜0.01）；激动剂LHRH和拮抗剂4F3B10联合作用HeLa细胞后，一定浓度的4F3B10确实可取消LHRH对细胞的增殖作用。激动剂LHRH和拮抗剂4F3B10作用HeLa细胞的时间检测结果显示，40μg/mL激动剂（LHRH）处理HeLa细胞24h、36h、48h和60h后均可明显促进细胞增殖，且均有显著性意义（P＜0.05）。由于LHRH处理HeLa细胞48h可极大地提高细胞增殖率，因此选择了48h作为LHRH处理HeLa细胞最佳作用时间；40μg/mL拮抗剂处理HeLa细胞24h、36h和48h后均可明显抑制细胞增殖，且均有显著性意义（P＜0.05），由于拮抗剂处理HeLa细胞48h可极大地抑制细胞增殖，因此选择了48h作为拮抗剂处理HeLa细胞最佳作用时间。　　对数生长期HeLa细胞分别经LHRH（10μg/ mL和40μg/ mL）和4F3B10（10μg/mL和40μg/ mL）作用48h，经固定后用PI染色液染色，流式细胞术检测细胞周期。结果显示，与阴性对照组比较，10μg/ mL和40μg/ mL LHRH试验组G1期细胞比例明显减少，同时S期细胞比例明显增加；激动剂可促进HeLa细胞由G1期向S期过渡，进而促进细胞周期的进程。与阴性对照组比较，10μg/mL和40μg/mL的4F3B10试验组G1期细胞比例增加；揭示4F3B10可阻滞HeLa细胞周期于G1期，进而抑制细胞周期的进程。激动剂（LHRH）促进人宫颈癌HeLa细胞由G1期向 S期过渡，进而有利于细胞周期的进程；拮抗剂（4F3B10）将HeLa细胞周期阻滞在G1期，从而可抑制细胞周期的进程。　　对数生长期HeLa细胞分别经LHRH（40μg/ mL）和4F3B10（40μg/ mL）作用48h后提取细胞总RNA，RNA经质量检测后与基因表达谱芯片杂交，再进行转录组学和生物信息学分析。结果显示，激动剂LHRH和拮抗剂4F3B10分别特异性结合细胞中LHRH受体后，通过调节Phosphoinositides and their down--stream targets、Calcium signaling pathway、FAS信号通路（CD95）和TRAIL-R引导的凋亡通路来影响细胞增殖情况。其中，激动剂作用在磷脂酰肌醇通路和Ca2+通路中比较显著，而拮抗剂在FAS信号通路（CD95）和TRAIL-R引导的凋亡通路中比较显著。在磷脂酰肌醇通路中发现LYN、BTK、GRASP、PRKM这四个基因上调，从而有利于细胞的生存及增殖。在Ca2+信号通路中发现ADRA--1A、ATP2B2、ATP2B4、CACNA1B、CACNA1C、CACNA1F、CACNA1H、CACNA1I、GNA15、GNAQ、GRIN1、GRIN2C、GRM5、HTR4、MYLK、PLCB1、PPP3CC和SLC8A1这些基因表达量变化，从而调节细胞的增殖。在 FAS信号通路中发现CAD、Caspase6、 Caspase8、CFLAR和FAS1这些基因上调，导致核中DNA的降解。在凋亡途径中发现Caspase6、Caspase8、Caspase10、CFLAR、FASLG、IRAK2、PPP3CB、PPKAR2A和TNFRSF10D这些基因上调，主要从半胱天冬酶底物裂解（cleavage of caspase substrate）和核酸片段化（DNA frag--mentation）方面诱导细胞凋亡。　　综上所述，癌症与LHRH受体表达呈显著相关性，从几种肿瘤细胞中筛选出LHRH受体表达量较高的细胞HeLa细胞，激动剂LHRH和拮抗剂4F3B10对HeLa细胞的增殖和周期皆有显著性作用，一定浓度的激动剂LHRH和拮抗剂4F3B10作用于HeLa细胞后，经转录组基因差异研究和生物信息学分析，筛选出有关的差异基因并研究其彼此之间的相互作用；这些基因mRNA上下调变化为深入研究LHRH受体作用机制奠定一定的基础。