临床和基础研究发现,长期过量摄入果糖可诱导机体产生代谢紊乱,促进肾功能损伤。课题组前期研究发现,高果糖饮食促进肾小球足细胞氧化应激,并伴随蛋白尿产生。苍术（Atractylodes lancea）和厚朴（Magnolia officinalis）是传统中药药对。现代研究表明苍术、厚朴均具有抗氧化、抗炎、肾保护作用,但具体分子作用机制尚需阐明。为此,本文在高果糖诱导大鼠肾和人源肾小球足细胞损伤模型上,探索苍术、厚朴及其药对的药理作用机制。本文利用前期课题组已建立高果糖诱导Sprague-Dawley大鼠肾损伤模型（造模16周）,在造模第8周时,分别灌胃给予苍术水提取物（0.72和1.09 g/kg）、厚朴水提取物（0.54和0.82 g/kg）、苍术和厚朴药对水提取物（0.72+0.54和1.09+0.82 g/kg）和阳性药别嘌呤醇（5mg/kg）,持续8周。与模型组比较,苍术、厚朴及其药对和别嘌呤醇均可降低模型动物尿蛋白与血清尿酸水平,升高尿液尿酸含量。这些研究结果提示苍术、厚朴及其药对可逆转高果糖诱导大鼠肾功能损伤和蛋白尿产生。在上述基础上,利用液相色谱-质谱联用（LC-MS）并结合同位素相对标记-绝对定量技术（iTRAQ）,分析上述各组动物肾小球中差异性表达蛋白。初步鉴定出超过2800个差异性表达蛋白。主成分分析（PCA）显示,正常组与其它各组呈现分离,而苍术和厚朴药对低、高剂量组和阳性药组呈现聚集。继之,选择苍术和厚朴药对高剂量组为示例进行基因组富集分析（GO）分析,发现其对氧化应激相关通路蛋白作用最为明显,提示该药对可能影响肾小球氧化应激。继之,在模型动物肾小球上观察到苍术和厚朴药对、别嘌呤醇均能显著提高超氧化物歧化酶（SOD）水平,降低丙二醛（MDA）水平,提示苍术和厚朴药对可降低高果糖引起的肾小球氧化应激。有文献报道细胞线粒体自噬不足可能引发氧化应激。本文首先选择自噬促进剂雷帕霉素共培养足细胞。与模型组比较,雷帕霉素显著升高足细胞线粒体自噬标志性蛋白E3泛素蛋白连接酶（Parkin）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Pink）、微管相关蛋白（LC3Ⅱ）及SOD表达,降低足细胞自噬选择性底物（P62）、活性氧簇（ROS）和MDA水平,即雷帕霉素可显著改善高果糖刺激所导致的线粒体自噬不足并缓解氧化应激,提示高果糖诱导足细胞线粒体自噬可能促进氧化应激。本文发现苍术和厚朴药对、别嘌呤醇显著上调模型动物肾小球Parkin、Pink和LC3Ⅱ表达水平,下调P62表达水平,从而改善肾小球线粒体自噬损伤,这些研究结果与其降低氧化应激的结果一致。本文进一步利用定量蛋白质组学鉴定与氧化应激密切相关的关键蛋白。选择正常组、模型组、苍术和厚朴药对高剂量组、阳性药组进行差异性蛋白表达分析。热图分析结果提示,与氧化应激密切相关蛋白二肽基肽酶-4（DPP4）在模型组中上调最为显著。经Western blot分析,与正常组比较,模型动物肾小球DPP4蛋白水平升高,这与蛋白组学分析结果一致。另在足细胞模型上,转染DPP4 siRNA可显著逆转高果糖所引起线粒体自噬水平的降低及氧化应激。再者,与模型组比较,苍术和厚朴药对、别嘌呤醇能显著抑制模型动物肾小球DPP4蛋白表达。这些研究结果提示苍术和厚朴药对可能通过抑制关键节点蛋白DPP4表达以改善肾小球线粒体自噬受损,进而缓解高果糖诱导肾小球氧化应激,发挥其肾保护作用。小结:苍术和厚朴药对可以通过下调DPP4蛋白表达水平,进而上调Parkin、Pink、LC3 Ⅱ蛋白表达水平,下调P62蛋白表达水平,提高线粒体自噬水平,进而逆转高果糖引起动物肾小球氧化应激损伤。本文初步揭示了苍术和厚朴药对肾保护新的分子作用机制,为临床防治高果糖饮食所致肾损伤提供实验基础。