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目的:探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)在RADA和RGD短肽水凝胶中的生长状况、增殖能力、细胞周期、干性基因表达及分化,研究水凝胶联合hAMSCs对小鼠全皮层缺损创面的修复效应和机制。方法:1.对RADA和RGD水凝胶分别采用透射电镜观察短肽水凝胶微观结构、圆二色光谱和流变学分析行表征检测;2.采用两酶分步消化法分离hAMSCs,并行贴壁培养、纯化细胞至P3代建立hAMSCs与RADA和RGD水凝胶细胞支架复合体以及二维对照组模型,观察各组细胞形态;采用Live/Dead检测hAMSCs在支架中的存活情况;CCK-8检测hAMSCs在水凝胶支架中的生长增殖情况;流式细胞术检测各组细胞周期情况;采用qPCR对比分析hAMSCs于水凝胶及2D环境中培养第4天时干性、生长因子、炎性因子和成骨分化基因的mRNA表达水平。3.将C57小鼠(N=120)随机分为六组:无血清培养基(对照)组,RADA水凝胶组,RGD水凝胶组,hAMSCs移植组,RADA+hAMSCs移植组和RGD+hAMSCs移植组。造模后第4,8,16,24天分别观察创面演变情况并取各组创面标本进行组织HE染色;免疫组化检测创面组织角蛋白14(Cytokeratin 14,K14)表达情况,免疫荧光检测创面组织CD31/MAB1281和PCNA表达情况,实时荧光定量PCR检测创面组织生长因子的mRNA基因表达。结果:1.RADA和RGD两种短肽可形成孔径约为5-200nm的β折叠纳米纤维支架水凝胶,具有一定弹性和粘度,成胶性能良好,RADA的弹性优于RGD。hAMSC在自组装短肽中可以保持长时间的生长增殖,细胞活性较好,但水凝胶中的细胞凋亡率较2D培养环境高。水凝胶培养条件下,hAMSC的干性基因、部分生长因子、炎性因子和成骨、成脂分化因子表达较2D环境均下降。2.水凝胶联合hAMSCs治疗可促进创面再上皮化,缩短创面愈合时间,提高愈合质量,CD31结果显示RGD水凝胶联合hAMSCs治疗可以为创面新生皮肤提供更多的新生血管,且荧光双染表示新生的血管中有部分细胞来源于移植的hAMSCs,说明水凝胶可以为创面的hAMSCs提供更好的生长环境,促进胶原的沉积,促进创伤前期EGF、bFGF、TGF-β的表达。结论:1.RADA和RGD两种短肽中hAMSCs可以保持长时间的生长增殖,细胞活性较好,hAMSC的干性基因、部分生长因子、炎性因子和成骨、成脂分化因子表达较2D环境均下降,而β-TubinⅢ表达上升,猜测hAMSCs在水凝胶中可能是向神经元方向分化。2.水凝胶联合hAMSCs治疗可促进创面再上皮化,缩短创面愈合时间,影响水凝胶中的hAMSCs部分分化为血管内皮细胞,为创面新生皮肤提供更多的新生血管,RGD序列可为创面中的干细胞提供一个更好的生长环境,促进生长因子的表达,加速创面愈合使创面提前再上皮化,促进汗腺增生和毛囊形成,提高愈合质量。