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目的:肥胖为目前世界上普遍存在的一种流行疾病,也是心血管疾病、高血压疾病、糖尿病等多种疾病的主要危险因素。肥胖病人容易发生高血压;然而,心脏作为心血管系统中的重要器官,与高血压的发生和发展有重要关系。心脏不仅是动力器官,也是一个内分泌器官,具有分泌心房钠尿肽(atrial natriuretic polypeptide, ANP)的功能;而且在右心房分泌数量多,又以右心耳为最。ANP具有排钠、利尿以及舒张血管的作用,对于调节血压具有重大影响;其浓度与高血压病的进程息息相关。但是,ANP与肥胖的关系目前尚不十分清楚,仍缺乏形态学方面的证据。本研究通过对肥胖大鼠右心耳组织标本,进行光镜和电镜观察,以及用免疫组织化学技术,对比观察肥胖和正常大鼠右心耳心肌对ANP抗体的反应,揭示肥胖大鼠右心耳的细微和超微结构特点,探讨肥胖与正常大鼠ANP反应强度的差异,为右心耳心肌细胞分泌ANP的形式和特点,提供形态学方面的依据。方法:1动物模型的制备与分组:选取健康成年雄性SD大鼠10只,随机分为对照组5只和高脂饮食组5只。对照组给予基础饲料,高脂饮食组给予高脂饲料,分别喂养10周。催肥造模成功后麻醉,处死动物取右心耳。2光镜样品制备与观察:高脂饮食组与对照组大鼠的右心耳标本,均进行石蜡包埋组织切片,行苏木精-伊红(haematoxylin-eosin, HE)染色后用光镜(light microscope,LM)观看。观察右心耳的结构,三层膜的排列,血管、淋巴管的分布情况,以及高脂组与对照组的染色区别。3免疫组织化学染色与观察:高脂饮食组与对照组大鼠的右心耳标本,进行常规石蜡包埋组织切片,按免疫组织化学ABC法,进行ANP免疫组化染色,另取一部分组织用PBS液代替抗体进行对照,最后用DAB显色。在Olympus显微镜下观察,显示右心耳组织中ANP的分布情况,以及高脂饮食组与对照组ANP分布和反应强度的差异。4透射电镜样品制备与观察:高脂组与对照组的右心耳均进行通常的电镜样品制备,右心耳行超薄组织切片后,用透射电镜(transmission electron microscope, TEM)观看。显示右心耳组织的超微结构以及心分泌颗粒的分布特点;观察心房肌细胞之间毛细血管及毛细淋巴管的结构特点。5扫描电镜样品制备与观察:将大鼠的右心耳组织进行扫描电镜样品制备,使用扫描电镜(scanning electron microscope, SEM)观看心内膜腔面和心外膜表面的结构特点。结果:1石蜡切片HE染色光镜观察:大鼠右心耳由三层结构组成,分别为心外膜、心内膜和心肌膜。在薄层的结缔组织外面再被覆一层上皮细胞,组成了心外膜,并且在不同的部位,心外膜下结缔组织的厚薄程度有差异。在此可见到许多血管和淋巴管。心外膜之下是心肌膜,此层可见纵行和环形排列的心肌纤维,两组心肌纤维交织成网状,并有大量的毛细血管存在于网孔之中。最内层是心内膜,由心内膜下层的结缔组织及扁平内皮细胞所组成。在对照组动物,显示心肌细胞的胞核形态、大小正常,边缘规则,形态清晰可见,心肌纤维排列规则,间质结构正常;然而,高脂饮食组的右心耳,显示心肌细胞的胞核发生形态改变,变粗,边缘不规则,心肌纤维排列紊乱,间质增宽似增生。2免疫组织化学染色光镜观察:心肌组织可见棕色的ANP阳性颗粒,分布于心肌细胞内,多分布于核周围,尤其是在核的两端,在肌原纤维之间,也有少量反应产物存在。而阴性对照组则未见ANP阳性颗粒在高脂饮食组的右心耳组织内,和对照组相比,ANP免疫反应明显增强,棕色着色颗粒明显增多。3透射电镜观察:扁平细胞组成了心外膜的上皮和心内膜的内皮,可以看到上皮细胞及内皮细胞。其中上皮细胞的连接比较松散,其间存在一些指状的突起,就是微绒毛,它们朝着心包腔面和基底面突起;然而,内皮细胞的连接相对比较紧密,其微绒毛稀疏而短小。上皮下和内皮下都是疏松结缔组织,胶原纤维是结缔组织的主要成分,在此可见血管、淋巴管、神经等。在右心耳心房肌细胞的纵向切面上,可看到线粒体和肌小节,在肌细胞核附近,能看到高尔基体和许多分泌颗粒;分泌颗粒大多呈圆形或椭圆形,电子密度较高,周围有界膜包裹。另外,分泌颗粒也存在于组织间隙附近的细胞膜处。这些分泌颗粒外包裹细胞膜和少量胞浆,形成乳头状突起。在心肌细胞的间隙中,还能看到被排出的分泌颗粒。在心房肌细胞之间,能看到毛细淋巴管和毛细血管。毛细淋巴管管壁较薄,管腔较大,形态不规则,管腔内常可观察到颗粒样物质和碎屑。而毛细血管内皮比较厚,腔内可见红细胞。在高脂饮食组动物,右心耳出现脂质沉积或脂肪变性,心房肌细胞肥大,细胞核边缘变得不规则,心房肌细胞之间的空隙变大,细胞内分泌颗粒普遍增多。4扫描电镜观察:大鼠右心耳的心外膜上皮为扁平细胞,形态不规则,边缘为波浪形,中央部稍微隆起;上皮细胞的表面有很多微绒毛,边缘的微绒毛长而密集。在相邻上皮细胞的交界处,常可见到孔隙样结构。右心耳的心内膜比较平整、光滑,所覆盖的内皮为条索状或皱褶状排列,而且在胞核存在的地方隆起。内皮细胞上的微绒毛稀疏,而且短小在心内膜表面,还能看到呈现嵴状隆起的肌束向心房腔内突出,形成所谓的梳状肌。结论:1采用高脂饮食喂养大鼠,可致其肥胖,使体重增加,成功建立营养性肥胖动物模型。2肥胖大鼠出现心肌组织的结构改变,引起间质内脂肪沉积,心肌纤维脂肪变性,甚至导致心肌细胞肥大。3肥胖大鼠右心耳内心钠肽免疫反应明显增强,反应部位显著增加,表面肥胖会导致心钠肽分泌增加,以代偿性调节血压;提示肥胖与心脏疾病的发生和发展有关。