暗黑鳃金龟Sigma家族GSTs蛋白对寄主植物挥发物降解作用

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暗黑鳃金龟(Holotrichia parallela Motschulsky)为鞘翅目 Coleoptera、金龟总科Scarabaeoidea、鳃金龟科Melolonthidae、齿爪鳃金龟属Holotrichia昆虫,分布于我国多个省区。幼虫称蛴螬,栖息于地下,以土壤中的腐殖质以及植物的种子、块茎、根部等为食,对玉米、花生、大豆、马铃薯等多种作物造成严重的危害。因其为害方式隐秘,传统的药剂防治难以产生理想的效果。鉴于此,开展暗黑鳃金龟嗅觉识别机制的研究,明确暗黑鳃金龟气味降解酶对植物挥发物的降解作用,为应用化学生态学手段防控地下害虫奠定了重要的实验基础。为了明确暗黑鳃金龟Sigma家族GSTs蛋白对植物挥发物的降解作用,本研究利用线上建模和分子对接技术揭示了Sigma家族GSTs蛋白和醛类化合物的互作;应用高效液相色谱法(HPLC)测定HparGSTs蛋白对醛类化合物的降解效果;并利用EAG系统和行为学实验测定了暗黑鳃金龟对醛类化合物的反应,主要研究结果如下:(1)利用Swissdock蛋白质线上同源建模软件对暗黑鳃金龟触角中表达的3种 Sigma 家族谷胱甘肽-S转移酶(Glutathione-S-transferases,GSTs)HparGSTS2、HparGSTS6和HparGSTS12进行了同源建模,并利用Autodock4.2分子对接软件将得到的三维模型与气味化合物进行分子对接模拟,以期找到与暗黑鳃金龟上述GSTs蛋白互作性高的化合物。HparGSTS2、HparGSTS6、HparGSTS12三种蛋白同源性较高,有相似的生理功能。在备选气味化合物中选出了与暗黑鳃金龟HparGSTS2、HparGSTS6、HparGSTS12有明显互作作用的六种化合物,分别为肉桂醛、反-2-己烯醛、反,反-2,4-庚二烯醛、2,4-己二烯醛、反,顺-2,6-壬二烯醛以及反-2-戊烯醛。(2)建立了暗黑鳃金龟HparGSTS2、HparGSTS6以及HparGSTS12与分子对接筛选所得化合物的体外实验反应体系,利用高效液相色谱法(HPLC)测定HparGSTs蛋白对植物挥发物的降解作用,明确其降解效率。HparGSTS2、HparGSTS6、HparGSTS12对6种气味化合物的降解效率测定。结果表明,暗黑鳃金龟HparGSTs对6种气味化合物有明显酶促反应降解功能,其中,3种蛋白对反-2-己烯醛的降解效率最高。仅HparGSTS12对反-2-戊烯醛未发现明显降解作用。(3)为进一步明确待测化合物与暗黑鳃金龟之间的关系,对化合物进行EAG和行为学分析,为筛选对暗黑鳃金龟有作用的食诱剂提供实验基础。EAG试验表明,该6种植物挥发物均能引起暗黑鳃金龟成虫的触角电位变化,而反-2-己烯醛对暗黑鳃金龟的影响较强,并且雌虫对于反-2-己烯醛的响应更为明显。通过Y型嗅觉仪及室内罩笼试验确定了反-2-己烯醛对暗黑鳃金龟成虫有吸引作用,并验证了反-2-己烯醛对于暗黑鳃金龟雌虫的影响大于雄性的结论。
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