【摘 要】
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为了研究无细胞系统中PrPSc对PrPc在体外的转化情况,我们构建了带有人PrP蛋白(23-231)(huPrPs)基因、D178N位突变的人PrP基因(huPrPm178)和仓鼠PrP基因(haPrP)的杆状病毒表达
【出 处】
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中国预防医学科学院 中国疾病预防控制中心
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为了研究无细胞系统中PrPSc对PrPc在体外的转化情况,我们构建了带有人PrP蛋白(23-231)(huPrPs)基因、D178N位突变的人PrP基因(huPrPm178)和仓鼠PrP基因(haPrP)的杆状病毒表达质粒,经转座反应后感染昆虫细胞Sf9,进行重组蛋白的表达.经PrP蛋白特异性单克隆抗体3F4Westernblot鉴定,在约30kD处3种PrP蛋白均出现单一的反应条带.将3种PrP蛋白在细胞内用<35>S甲硫氨酸标记,与纯化的Scrapie263K毒株仓鼠感染脑组织PrPSc蛋白共同孵育.反应产物经蛋白酶K消化后,SDS-PAGE电泳,放射自显影.结果haPrP出现了3条抵抗蛋白酶K消化的条带,表明haPrP-SEN可被转化为HAPrP-res.而两种人PrP蛋白经蛋白酶K消化后未见明显的蛋白酶抗生条带出现,这提示PrP-sen向PrP-res转化过程中,蛋白分子间的相互特异性识别起着重要的作用.PrP蛋白无细胞转化系统的建立为进一步研究PrP蛋白间的相互作用,蛋白结构与生物学功能用至结构与感染特性的研究提供了新方法.
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