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[目的]侵袭转移是恶性肿瘤的主要特征之一,是导致恶性肿瘤患者死亡的首要因素。近年来研究发现,趋化因子及其受体在肿瘤细胞的迁移、侵袭和转移过程中起关键作用。我们前期研究发现,趋化因子Mig/受体CXCR3与口腔舌鳞癌细胞侵袭转移密切相关,但其确切的分子机制尚不明了。本研究以口腔舌鳞癌细胞为对象,探索Mig/CXCR3生物轴诱导癌细胞上皮-间质转化(EMT)和迁移侵袭的作用及相关机制,以期为口腔癌的转移防治提供新思路。[方法](1)采用基因转染和基因敲减的方法构建高表达及低表达趋化因子受体CXCR3的口腔舌鳞癌Cal-27细胞。(2)实验分组①：Cal-27细胞采用不同浓度的Mig(50nM,100nM,150nM)及CXCR3中和抗体处理,分为：对照组、Mig组、CXCR3中和抗体组及IgG组。分组②：采用100 nM的Mig处理高表达CXCR3的Cal-27细胞,分为：GFP对照组、GFP对照+Mig组、CXCR3组、CXCR3+Mig组。分组③：采用100 nM的Mig处理低表达CXCR3的Cal-27细胞,分为：Scramble-shRNA对照组、Scramble-shRNA对照+Mig组、CXCR3-shRNA组、CXCR3-shRNA+Mig组。(3)CCK8法检测细胞增殖率。(4)划痕实验检测细胞的迁移能力。(5) Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。(6)采用poly-HEMA包被的培养皿培养细胞建立细胞失巢性凋亡模型,Annexin V-FITC/PI标记流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。(7)荧光显微镜观察细胞中罗丹明标记的鬼笔环肽特异性结合F-actin的周边聚集情况。(8)荧光显微镜观察细胞EMT标志物E-cadherin和Vimentin的表达。(9)免疫印迹检测细胞Snail、E-cadherin、Vimentiin、Akt2、p-Akt2、Erkl/2、 p-Erk1/2、eIF4E及p-eIF4E的蛋白表达量。(10) SPSS17.0统计软件对数据进行统计学分析。[结果](1)CCK8法检测各组细胞增殖率发现Mig不影响Cal-27细胞的增殖,也不依赖于CXCR3的表达水平(p>0.05)。(2)划痕实验检测各组细胞迁移率发现加入浓度梯度的Mig促进Cal-27细胞的迁移,且呈现浓度依赖性(p<0.05)；加入CXCR3中和抗体阻断Mig与CXCR3结合后,与Mig组相比迁移率明显降低,差异具有统计学意义(p<0.05);上调CXCR3表达促进Mig对Cal-27细胞的迁移作用,与GFP组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)；降低CXCR3的表达能抑制Mig对Cal-27细胞的迁移作用,与Scramble-shRNA组相比,差异具有统计学意义(p<0.05)。(3) Transwell侵袭实验检测发现Mig能明显提高Cal-27细胞的侵袭能力,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);加入CXCR3中和抗体后,侵袭出的细胞数明显减少,与Mig组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);提高CXCR3的表达后,促进了Mig对Cal-27细胞的侵袭作用,与GFP组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)；降低CXCR3的表达后,减弱了Mig对Cal-27细胞的侵袭作用,与Scramble-shRNA组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)流式细胞仪检测细胞失巢性凋亡率发现Mig能抑制Cal-27细胞的失巢性凋亡,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);提高CXCR3的表达促进Mig对Cal-27细胞失巢性凋亡的抑制作用,与GFP对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)；降低CXCR3的表达减弱Mig对Cal-27细胞失巢性凋亡的抑制作用,与Scramble-shRNA组相比,差异具有统计学意义(p<0.05)。(5)荧光显微镜观察各组细胞中F-actin的周边聚集情况发现Mig能诱导Cal-27细胞F-actin的周边聚集；CXCR3中和抗体阻断后,Cal-27细胞F-actin的周边聚集减少；高表达CXCR3后,Mig对Cal-27细胞F-actin的周边聚集作用明显增强；低表达CXCR3后,Mig对Cal-27细胞F-actin的周边聚集作用减弱。(6)免疫荧光及免疫印迹检测均发现,Cal-27细胞经Mig因子处理后,上皮细胞标志物E-cadherin表达强度明显减弱,而间质细胞标志物Vimentin表达强度则增强(P<0.05)；高表达CXCR3后能促进Mig因子的以上作用,而低表达CXCR3或中和抗体阻断CXCR3后,Mig因子的以上作用则受到抑制(P<0.05)。免疫印迹检测发现Mig诱导后,与对照组相比,Snail蛋白相对表达量明显上调,加入CXCR3中和抗体后,与Mig组相比,Snail的相对表达量有所下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)；高表达CXCR3能促进Mig诱导的Snail蛋白上调,与GFP对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);低表达CXCR3抑制了Mig诱导的Snail蛋白表达,与Scramble组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。(7)免疫印迹检测发现Mig诱导后,Cal-27细胞Akt2及eIF4E磷酸化水平明显提高,与对照组相比,p-Akt2及p-eIF4E的相对表达量差异均具有统计学意义(p<0.05),而Erkl/2的磷酸化水平没有明显变化(p>0.05)；在加入CXCR3中和抗体后,与Mig组相比,p-Akt2及p-eIF4E的相对表达量均明显下降,差异均具有统计学意义(p<0.05)；高表达CXCR3能促进Mig诱导的Akt2及eIF4E的磷酸化,与GFP组相比,p-Akt2及p-eIF4E的相对表达量均上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)；低表达CXCR3能抑制Mig诱导的Akt2及eIF4E的磷酸化,与Scramble-shRNA组相比,p-Akt2及p-eIF4E的相对表达量均下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。[结论]Mig/CXCR3轴能激活口腔舌鳞癌细胞内Akt信号通路,诱导癌细胞发生上皮-间质转化,抵抗癌细胞失巢性凋亡,重排细胞骨架,介导癌细胞迁移侵袭发生。