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该实验采用益生菌中常见的双歧杆菌作为研究对象,观察其基因组DNA对脐带血单个核细胞(CBMC)的影响,以了解双歧杆菌DNA的免疫调节作用,探讨双歧杆菌抗过敏反应可能的机制.研究方法厌氧培养双歧杆菌,提取纯化双歧杆菌基因组DNA(Bifidobacterium DNA,bDNA)体外刺激脐带血单个核细胞(CBMC),以空白、DNase Ⅰ完全酶解的bDNA和人DNA作为对照.实验分组:①空白对照组:无任何刺激物;②双歧杆菌基因组DNA(bDNA)(加入bDNA 25μg/ml)组;③完全酶解双歧杆菌基因组DNA(d-bDNA)(加入d-bDNA 25μg/ml)组;④人类DNA(hDNA)(加入hDNA 25μg/ml)组.在刺激后4个时间点(6h、1 2h、24h、48h)终止培养,收集细胞并保存培养上清,用于检测以下指标:1 ELISA(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay)测定培养上清中单核-巨噬细胞源细胞因子IL-12、IL-10的水平;2观察bDNA对T细胞源细胞因子IFN-γ和IL-4分泌的影响:采用ELISPOT(Enzyme Linked Immuno Spot)法计数分泌IFN-γ和IL-4的阳性细胞数量;3抽提细胞总RNA,逆转录获得cDNA,然后PCR(PolymeraseChain Reaction)法扩增目的cDNA,以检测细胞内信号蛋白T-bet(T-box expressed in T cells)、GATA3 mRNA表达强度的变化.结论:bDNA能够促使CBMC分泌Th1型细胞因子IL-12增加,而Th2型细胞因子IL-10的水平有下降的趋势;bDNA的刺激可导致分泌IFN-γ的阳性细胞数量增多,而分泌IL-4的阳性细胞数量减少;bDNA可促使T细胞中T-bet mRNA表达增高,但对GATA3 mRNA表达影响不明显.以上结果提示双歧杆菌基因组DNA可上调CBMC IL-12、IFN-γ分泌及T-bet表达,下调IL-4分泌,从而促进CBMC T<,H>1应答.这可能是双歧杆菌产生抗过敏作用的重要机制之一.