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肝纤维化是肝脏对慢性损伤的一种修复反应,是持续性肝损伤的共有病理改变,肝细胞发生持续、反复的坏死或炎症刺激,大量纤维增生同时伴有纤维降解的相对或绝对不足,ECM在肝内大量沉积并最终演变为肝硬化乃至肝功能衰竭。近来研究认为,肝纤维化属可逆性病变,去除损伤因素或者应用抗纤维化药物,随着恢复时间延长,肝纤维化是可以部分或者完全的逆转恢复,表现为沉积的胶原降解,肝脏结构和肝脏功能的恢复。在肝纤维化逆转这一过程中起关键作用的是肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）的凋亡,因此,诱导肝星状细胞凋亡成为促进肝纤维化恢复的重要途径之一。研究显示在肝纤维化形成及恢复阶段,枯否细胞（Kupffer,KC）发挥了双刃剑的作用。在肝纤维化进展期可促进HSC的激活,促进肝纤维化的形成;在肝纤维化恢复期,KC及活化的HSC可通过表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）及其他凋亡刺激因子从而促进HSC的凋亡,促进ECM的降解,从而抑制肝纤维化的形成。然而,各种细胞因子以及细胞信号传导通路的作用机制目前尚不清楚。为了进一步揭示肝纤维化恢复过程中TRAIL和MAPK信号通路的作用。本研究拟选用CCl4诱导大鼠建立肝纤维化自发逆转恢复模型,研究肝纤维化逆转与TRAIL及MAPK信号通路的关系,探讨参与这一过程可能的HSC内信号传导通路以及TRAIL对该通路的影响。研究内容包括以下三个部分:1.制备肝纤维化及逆转期的动物模型CCl4皮下注射为建立肝纤维化经典方法,停止注射后可自发逆转。本实验中反映肝损伤和肝纤维化指标ALT、AST、Hyp、LN、PⅢN P ,在CCl4皮下注射12周后显著增加,于自发恢复2,4,6,8周末逐渐降低,同时,病理组织学Masson胶原染色亦显示去除造模因素后,大鼠肝脏病理表现与肝纤维化分期逐渐改善,表明大鼠肝纤维化及其逆转恢复期动物模型建立成功。2.在整体动物模型上研究TRAIL和MAPK信号通路蛋白在逆转恢复期的动态表达变化以及与肝纤维化逆转期Hyp的相关性实验结果显示,p-ERK1/2在模型组表达最低,与正常组相比差异显著（**p<0.01）,恢复4周表达最高,与模型组相比差异显著（##p<0.01）,以后逐渐降至正常。p-JNK1/2在模型组表达最低（**p<0.01）,恢复期增高（#p<0.05）。p-P38在模型组表达最高（**p<0.01）,恢复期逐渐降低（#p<0.05）。TRAIL在模型组表达最低（**p<0.01）,恢复2周表达最高（##p<0.01）,恢复4周、6周、6周表达逐渐降低（##p<0.01）。相关性研究显示,TRAIL与Hyp呈负相关且差异有统计学意义（r=-0.34 ,p=0.019）;p-ERK/ERK与Hyp呈负相关且差异有统计学意义（r=-0.46,p=0.003）;p-JNK/JNK与Hyp呈负相关且差异有统计学意义（r=-0.53,p=0.0004）;p-P38/P38与Hyp呈正相关且差异有统计学意义（r=0.81,p=0.0001）。3.体外实验研究TRAIL对经原代灌流分离肝纤维化逆转恢复期大鼠HSC增殖的调控本实验采用Western blot检测不同分组的HSC中MAPK信号通路蛋白表达和流式细胞仪法检测不同实验组HSC的凋亡情况及细胞周期发现,（1）原代分离恢复四周HSC经TRAIL（400μg/L）,PD98059（30μM）预处理24h后;结果显示与模型组相比TRAIL（400μg/L）预处理组可显著降低恢复期HSC中p-ERK1/2表达,提示在肝纤维化恢复期TRAIL通过降低HSC中p-ERK1/2表达,抑制HSC的增殖,促进恢复期HSC凋亡。原代分离恢复四周HSC经TRAIL（400μg/L）,SP600125 （100ng/ml）预处理24h后;结果显示与模型组相比TRAIL（400μg/L）预处理组可显著降低恢复期HSC中p-JNK1/2表达,提示在肝纤维化恢复期TRAIL通过降低HSC中p-JNK1/2表达,抑制HSC的增殖,促进恢复期HSC凋亡。原代分离恢复四周HSC经TRAIL（400μg/L）,SB203580 （50μM）预处理24h后;结果显示与模型组相比TRAIL（400μg/L）预处理组可显著降低恢复期HSC中p-P38表达,提示在肝纤维化恢复期TRAIL通过降低HSC中p-P38表达,抑制HSC的增殖,促进恢复期HSC凋亡。（2） AV/PI双染结果显示,与正常组相比,逆转期HSC存在自发凋亡,为10.1%左右,TRAIL（100, 200, 400μg/L）预处理组可明显促进HSC的凋亡（P <0.05）,凋亡百分比分别为19.7%、25.1%和33.1%。提示在肝纤维化恢复期TRAIL可促进HSC的凋亡。（3） PI单染细胞周期结果显示,TRAIL（100, 200, 400μg/L）预处理组细胞24h后,与恢复期HSC相比,TRAIL各浓度预处理组,G0/G1其细胞比例明显增加（P<0.01）,S期细胞比例明显减少（P<0.01）,细胞阻滞于G1/S期。综上,本实验证明了在大鼠肝纤维化逆转期MAPK信号通路与TRAIL的蛋白表达与肝纤维化逆转的相关性;证明了TRAIL能够促进逆转期HSC细胞凋亡,并影响其细胞周期;初步阐明了TRAIL可能通过MAPK信号通路调节肝纤维化的逆转;为TRAIL应用于肝纤维化治疗提供了体外实验基础;为评价、筛选肝纤维化治疗药物提供了新的思路。