目的 肺泡巨噬细胞是驻留在肺泡表面的一类巨噬细胞,在肺免疫应答和肺表面活性物质清除等方面发挥重要作用。然而,调控肺泡巨噬细胞发育和功能的分子机制还有待进一步研究。雷帕霉素哺乳动物靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）是一个丝氨酸/苏氨酸激酶,mTOR的活性受结节性硬化症复合物1/2（tuberous sclerosis 1/2,TSC1/2）调控,TSC1-mTOR通路在细胞发育、增殖和代谢等过程中发挥重要作用,但其在肺泡巨噬细胞中的作用机制还需要更加深入的研究。方法 在本研究中,通过构建在肺泡巨噬细胞中特异性敲除Tsc1基因(Tsc1f/f-Cd11c-Cre,Tsc1f/f-Lys M-Cre)、mTor基因(mTorf/f-Cd11c-Cre)、Rptor（mTORC1,mTOR复合物1）基因(Rptorf/f-Cd11c-Cre)小鼠,研究了TSC1-mTOR信号通路对肺泡巨噬细胞的调控作用。采用流式细胞术检测分析肺泡巨噬细胞Tsc1敲除小鼠、mTor敲除小鼠、Rptor敲除小鼠肺组织单细胞悬液和支气管肺泡灌洗液中肺泡巨噬细胞的占免疫细胞的百分比和数量,以及肺泡巨噬细胞的增殖和死亡情况;采用免疫印迹法检测分析细胞凋亡和坏死信号的激活情况,以及细胞因子白介素-13（Interleukin-13,IL-13）信号通路的激活。通过检测细胞释放到胞外的乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）含量,分析巨噬细胞的死亡程度;采用实时荧光定量PCR检测M2巨噬细胞特征性基因,肺泡巨噬细胞标志基因,以及IL-13受体基因的表达。结果 流式细胞术检测分析发现,与对照组野生型（WT）小鼠相比,Tsc1f/f-Cd11c-Cre和Tsc1f/f-Lys M-Cre小鼠肺组织单细胞悬液和支气管肺泡灌洗液中肺泡巨噬细胞的所占免疫细胞的百分比和数量都显著性降低。此外,与对照组野生型（WT）小鼠相比,mTorf/f-Cd11c-Cre和Rptorf/f-Cd11c-Cre小鼠肺组织单细胞悬液和支气管肺泡灌洗液中肺泡巨噬细胞的所占免疫细胞的百分比和数量也都显著性降低。机制上,Tsc1缺失后,巨噬细胞的凋亡和坏死都显著增高。虽然参与调控肺泡巨噬细胞稳态维持和功能的多种细胞因子,包括粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF）、巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor,M-CSF）、转化生长因子-b（transforming growth factor-β,TGF-b）和IL-13都能激活mTOR,但Tsc1缺失主要影响了IL-13诱导的JAK1和STAT3的磷酸化激活。此外,IL-13诱导的一些基因,包括M2巨噬细胞特征性基因（如Arg1、Fizz、Ym1和Clec7a）、肺泡巨噬细胞标志基因（如Pparg、Fabp4/5、Nfil3和Car4）,以及IL-13受体基因（如Il13ra1、Il13ra2）,均受到TSC1-mTOR信号通路的调控。结论 Tsc1敲除、mTor敲除和Rptor敲除都导致肺泡巨噬细胞的数量显著性降低,表明mTORC1活性的精准调控对肺泡巨噬细胞稳态维持具有至关重要的作用。Tsc1缺失的巨噬细胞容易发生凋亡和坏死,这可能是导致Tsc1敲除小鼠中肺泡巨噬细胞数量减少的原因。同时,TSC1调控肺泡巨噬细胞中IL-13信号通路激活和诱导的基因表达。综上,本研究的结果表明,TSC1-mTOR通路通过整合细胞因子信号和代谢信号,在肺泡巨噬细胞稳态维持和IL-13信号应答中起关键作用,为研究肺泡巨噬细胞的调控机制及肺部免疫反应提供了新思路。