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目的:通过外源性给予NK细胞封闭抗体(anti-Asialo GM-1)消除NK细胞,探讨NK细胞在脑型疟疾中的免疫调节作用。研究方法:1、雌性C57BL/6小鼠随机分成3组,每组14只,分别为正常对照组(Normal group)、感染对照组(Infection group)、NK细胞消除组(anti-Asialo GM-1 group)。2、感染对照组和NK细胞消除组小鼠经腹腔内注射伯氏疟原虫ANKA株(Pb ANKA)感染的红细胞(iRBC)1×10~6个,NK细胞消除组小鼠在感染前1 d和感染后2 d腹腔内注射NK细胞封闭抗体anti-Asialo GM-1,15μl/只。正常对照组和感染对照组注射等量PBS。3、于感染后3 d起,每天采用吉姆萨染色的血涂片观察原虫血症水平,并监测小鼠神经体征和死亡情况。4、于感染后6 d,伊文思蓝(EB)染液法检测小鼠血脑屏障通透性。5、于感染后3 d和5 d,杀鼠取脾脏,流式细胞术检测小鼠脾细胞中NK细胞、Th1型细胞、调节性T细胞(Tregs)、树突状细胞(DCs)及其亚群的百分含量。6、于感染后3 d和5 d,杀鼠取脾脏,体外培养脾细胞,48 h后收集培养上清。ELISA检测小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10(IL-10)的分泌水平。结果:1、在感染后3 d和5 d,NK细胞消除组脾脏中NK细胞(CD3~-NK1.1~+)百分比一直保持低水平,并明显低于感染对照组(P<0.01)。2、感染对照组小鼠在感染后6 d开始出现死亡,并伴有神经症状,8 d全部死亡;NK细胞消除组小鼠在感染后7 d开始出现死亡,12 d全部死亡。血涂片观察结果显示,在感染后7 d,NK细胞消除组原虫血症高于感染对照组(P<0.05)。3、EB染液法检测结果显示,与正常对照组相比,感染对照组小鼠血脑屏障严重破坏,有明显的EB外渗(P<0.01)。NK细胞消除组小鼠脑组织可见少量EB外渗,但与感染对照组相比显著减轻(P<0.01)。4、在感染后3 d,感染对照组Th1型细胞(CD4~+T-bet~+IFN-γ~+)百分含量与正常对照组、NK细胞消除组相比,均无统计学差异。在感染后5 d,感染对照组Th1型细胞百分含量高于正常对照组(P<0.01),NK细胞消除组Th1型细胞百分含量低于感染对照组(P<0.01)。5、在感染后3 d和5 d,感染对照组Tregs(CD4~+CD25~+Foxp3~+)百分含量高于正常对照组(P<0.01),NK细胞消除组Tregs百分含量高于感染对照组(P<0.01)。6、在感染后3 d,感染对照组CD11c~+DC百分含量高于正常对照组(P<0.05)。在感染后3 d和5 d,NK细胞消除组CD11c~+DC百分含量低于感染对照组(P<0.01);在感染后3 d,感染对照组mDC(CD11c~+CD11b~+)和pDC(CD11c~+B220~+)百分含量均高于正常对照组(P<0.05)。在感染后5 d,感染对照组mDC百分含量高于正常对照组(P<0.01),而pDC百分含量低于正常对照组(P<0.05)。NK细胞消除组mDC的百分含量低于感染对照组(P<0.05),两组间pDC百分含量无统计学差异。7、在感染后3 d和5 d,感染对照组MHCⅡ~+CD11c~+、CD40~+CD11c~+、TLR2~+CD11c~+和TLR9~+CD11c~+的百分含量均高于正常对照组(P<0.05或P<0.01),NK细胞消除组MHCⅡ~+CD11c~+、CD40~+CD11c~+、TLR2~+CD11c~+和TLR9~+CD11c~+的百分含量均低于感染对照组(P<0.05或P<0.01)。8、在感染后3 d和5 d,感染对照组IFN-γ和TNF-α水平均高于正常对照组(P<0.01或P<0.05),NK细胞消除组IFN-γ和TNF-α水平均低于感染对照组(P<0.01或P<0.05);在感染后5 d,感染对照组IL-10水平高于正常对照组(P<0.05)。在感染后3 d和5 d,NK细胞消除组IL-10水平均高于感染对照组(P<0.05)。结论:1、NK细胞参与介导CM的发生,消除NK细胞可使Pb ANKA感染小鼠生存时间延长,并改善其血脑屏障损伤程度。2、NK细胞可通过调控Th1/Treg应答的平衡,影响CM的发生发展。消除NK细胞使Pb ANKA感染小鼠Th1免疫应答减弱、促炎性细胞因子释放减少,而使Tregs免疫应答增强、抗炎性细胞因子分泌增加,从而改变了CM的进程。3、NK细胞与DCs的分化、成熟和活化有关,在CM中,NK细胞消除影响了DCs成熟和活化状态,减少了DCs向mDC分化,进而影响Th1应答的有效建立。