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第一部分 丙泊酚、雌激素及缺血预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤保护作用的比较目的:比较丙泊酚(Pro)、雌激素(E2)及缺血预处理(IPC)三种预处理方式对大鼠RIRI保护作用的差异。方法:取SD雄性大鼠120只,随机分为6组,每组20只:对照组(Control):不做任何处理;假手术组(Sham):只切除大鼠右侧肾脏;缺血再灌注损伤组(I/R):切除大鼠右侧肾脏,阻断左肾动脉血流45 min;雌激素预处理组(E2+I/R):术前三天给大鼠一日一次腹腔注射雌激素(100 ug/kg),其余同I/R组;丙泊酚预处理组(Pro+I/R):术前三天给大鼠一日一次腹腔注射丙泊酚(50 mg/kg),其余同I/R组;缺血预处理组(IPC+I/R):切除大鼠右侧肾脏,阻断左肾动脉血流8 min,再复灌5 min,重复三次后阻断左肾动脉血流,其余同I/R组。6 h、24 h后,检测大鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)值,HE染色肾组织病理切片,进行Paller评价。结果:(1)6 h、24 h Control组与Sham组比较,血清BUN和Cr水平无统计学意义;I/R组与Control组比较,血清BUN和Cr水平显著升高(P<0.01)。与Control 6 h组比较,IPC+I/R 6 h组、Pro+I/R 6 h组、E2+I/R 6 h组血清BUN和Cr水平略升高,但无统计学意义(P>0.05)。与Control 24 h组比较,IPC+I/R 24 h组、Pro+I/R 24 h组、E2+I/R 24 h组的血清BUN和Cr水平升高(P<0.05)。IPC+I/R组、Pro+I/R组、E2+I/R组在6 h、24 h与I/R组比较血清BUN、Cr水平均显著降低(P<0.01)。在6 h、24 h IPC+I/R组、Pro+I/R组及E2+I/R组之间比较血清BUN、Cr水平无统计学差异。(2)6 h、24 h Control组与Sham组比较肾组织HE染色未发现明显形态学改变,Paller评分也无无统计学意义(P>0.05);与Control组比较,I/R组肾组织有明显病理学改变,Paller评分明显高于Control组(P<0.05)。在各时间点上,而IPC+I/R组、Pro+I/R组、E2+I/R组同样可见肾脏组织结构损害,Paller损伤评分高于Control组(P<0.05),但肾组织病理改变减轻,Paller损伤评分显著低于I/R组(P<0.05)。Paller评分在6 h、24 h,E2+I/R组均低于Pro+I/R组和IPC+I/R组,但与Pro+I/R组差异具有统计学意义(P<0.05),与IPC+I/R组则无(P>0.05)。IPC+I/R 6 h组与Pro+I/R 6 h组比较,无统计学意义(P>0.05)。Pro+I/R 24 h组与IPC+I/R 24 h组比较,Paller评分升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RIRI可以造成大鼠肾脏组织出现病理性改变及肾功能下降,而E2、Pro及IPC预处理对RIRI均具有保护作用。三种预处理方法之间比较,E2对于RIRI具有较强的保护作用。第二部分 丙泊酚、雌激素及缺血预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤肾叶间动脉舒缩活动影响的比较和机制研究实验一 丙泊酚、雌激素及缺血预处理对大鼠缺血再灌注损伤后肾叶间动脉舒缩功能的影响的比较目的:研究并比较丙泊酚(Pro)、雌激素(E2)、及缺血预处理(IPC)三种预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾叶间动脉血管(RIA)的舒缩功能的影响,探讨三种预处理对肾缺血再灌注损伤影响的机制。方法:取SD雄性大鼠120只,随机分为6组,每组20只:对照组(Control):不做任何处理;假手术组(Sham):只切除大鼠右侧肾脏;缺血再灌注损伤组(I/R):切除大鼠右侧肾脏,阻断左肾动脉血流45 mins;雌激素预处理组(E2+I/R):术前三天给大鼠一日一次腹腔注射雌激素(100 ug/kg),其余同I/R组;丙泊酚预处理组(Pro+I/R):术前三天给大鼠一日一次腹腔注射丙泊酚(50 mg/kg),其余同I/R组;缺血预处理组(IPC+I/R):切除大鼠右侧肾脏,阻断左肾动脉血流8 min,再复灌5 min,重复三次后阻断左肾动脉血流,其余同I/R组。6 h、24 h后,剥离肾叶间动脉,行压力肌动实验,观察各组肾叶间动脉的收缩功能。结果:(1)与Control组比较,6 h、24 h Sham组RIA收缩率无明显变化(P>0.05)。与Control比较,6 h、24 h I/R组RIA收缩率明显降低(P<0.01)。6 h、24 h与I/R组比较,Pro+I/R组、E2+I/R组和IPC+I/R组RIA收缩率明显升高(P<0.01)。6 h、24 h与E2+I/R组比较,Pro+I/R组RIA收缩率虽有升高,但无统计学意义(P>0.05),IPC+I/R组RIA收缩率升高具有统计学意义(P<0.05)。与Control组比较,E2+I/R 6 h组、Pro+I/R6 h组和IPC+I/R组的RIA收缩率及速率无统计学意义(P>0.05),而E2+I/R 24 h组、Pro+I/R 24 h组和IPC+I/R组均具有统计学差异(P<0.05)。(2)与正常Control组比较,6 h、24 h Sham组RIA收缩速率无明显变化,无统计学差异(P>0.05)。在6 h时间点,与Control组比较,I/R组RIA收缩速率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与Control组比较,IPC+I/R组RIA收缩速率降低,差异有统计学意义(P<0.05),而E2+I/R组和Pro+I/R组RIA收缩速率无统计学差异;与I/R组比较,E2+I/R组、IPC+I/R组RIA收缩速率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与E2+I/R组比较,IPC+I/R组RIA收缩速率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。在24 h时间点,与Control组比较,E2+I/R组、Pro+I/R组及IPC+I/R组RIA收缩速率均降低,具有统计学意义(P<0.05);与E2+I/R组比较,IPC+I/R组收缩速率降低,差异有统计学意义(P<0.05),Pro+I/R组无统计学差异(P>0.05);与Pro+I/R组RIA收缩速率比较,IPC+I/R 24 h组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:肾缺血再灌注损伤引起了RIA舒缩功能的下降,而Pro、E2及IPC预处理可能通过改善RIA收缩率及收缩速率来发挥保护作用,其中E2的作用最强。实验二 丙泊酚、雌激素及缺血预处理对大鼠缺血再灌注损伤后肾叶间动脉中Cx43 m RNA表达的影响目的:研究并比较丙泊酚(Pro)、雌激素(E2)及缺血预处理(IPC)三种预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤肾叶间动脉血管(RIA)中Cx43 m RNA表达的影响,探讨三种预处理对肾缺血再灌注损伤影响的机制。方法:取SD雄性大鼠120只,随机分为6组,每组20只:对照组(Control):不做任何处理;假手术组(Sham):只切除大鼠右侧肾脏;缺血再灌注损伤组(I/R):切除大鼠右侧肾脏,阻断左肾动脉血流45 min;雌激素预处理组(E2+I/R):术前三天给大鼠一日一次腹腔注射雌激素(100 ug/kg),其余同I/R组;丙泊酚预处理组(Pro+I/R):术前三天给大鼠一日一次腹腔注射丙泊酚(50 mg/kg),其余同I/R组;缺血预处理组(IPC+I/R):切除大鼠右侧肾脏,阻断左肾动脉血流8 min,再复灌5 min,重复三次后阻断左肾动脉血流,其余同I/R组。6 h、24 h后,剥离肾叶间动脉。应用RT-PCR检测各组大鼠肾叶间动脉Cx43 m RNA的表达。结果:6 h、24 h Sham组与Control组比较Cx43 m RNA表达水平无差异(P>0.05);I/R组、Pro+I/R组、E2+I/R组和IPC+I/R组Cx43 m RNA表达水平与Control组比较均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与I/R组比较,Pro+I/R组、E2+I/R组和IPC+I/R组Cx43 m RNA表达水平明显下降(P<0.05)。E2+I/R 6 h组Cx43 m RNA表达水平较Pro+I/R 6 h组和IPC+I/R 6 h组均有所下降,但无统计学意义(P>0.05)。Pro+I/R 24 h组Cx43 m RNA表达水平与E2+I/R 24 h组比较无统计学意义(P>0.05),但IPC+I/R组Cx43 m RNA表达水平与E2+I/R组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:大鼠RIRI后RIA的Cx43 m RNA表达水平增加,提示RIA中Cx43 m RNA的表达水平与肾缺血再灌注损伤可能具有相关性。Pro、E2及IPC预处理的保护机制可能与下调RIA的Cx43 m RNA表达水平有关,其中E2下调RIA中Cx43 m RNA表达水平幅度最大。实验三丙泊酚、雌激素及缺血预处理对大鼠缺血再灌注损伤后肾叶间动脉中Cx43蛋白表达的影响目的:研究并比较丙泊酚(Pro)、雌激素(E2)及缺血预处理(IPC)三种预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤肾叶间动脉血管(RIA)的Cx43蛋白表达的影响,探讨三种预处理对肾缺血再灌注损伤影响的机制。方法:取SD雄性大鼠120只,随机分为6组,每组20只:对照组(Control):不做任何处理;假手术组(Sham):只切除大鼠右侧肾脏;缺血再灌注损伤组(I/R):切除大鼠右侧肾脏,阻断左肾动脉血流45 min;雌激素预处理组(E2+I/R):术前三天给大鼠一日一次腹腔注射雌激素(100 ug/kg),其余同I/R组;丙泊酚预处理组(Pro+I/R):术前三天给大鼠一日一次腹腔注射丙泊酚(50 mg/kg),其余同I/R组;缺血预处理组(IPC+I/R):切除大鼠右侧肾脏,阻断左肾动脉血流8 min,再复灌5 min,重复三次后阻断左肾动脉血流,其余同I/R组。6 h、24 h后,剥离肾叶间动脉,运用Western-blot方法检测各组大鼠肾叶间动脉Cx43蛋白的表达。结果:6 h、24 h,Sham组与Control组比较RIA上Cx43蛋白表达水平均无统计学意义。I/R 6 h组Cx43蛋白表达水平与Control组比较显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。IPC+I/R 6 h组Cx43蛋白表达水平与E2+I/R组相比较高,差异具有统计学意义(P<0.05)。E2+I/R 6 h组、Pro+I/R 6 h组及IPC+I/R 6 h组Cx43蛋白表达水平与Control组比较增高,但有统计学意义(P>0.05)。E2+I/R 6 h组、Pro+I/R 6 h组及IPC+I/R 6 h组Cx43蛋白表达水平与I/R 6 h组比较明显下降(P<0.05)。E2+I/R 6 h组与IPC+I/R 6h组相比,具有统计学差异(P<0.05),与Pro+I/R 6 h组相比,无统计学差异(P<0.05)。6 h、24 h Pro+I/R组与IPC+I/R组相比均无统计学意义(P>0.05)。I/R 24 h组与Control组比较,Cx43表达水平明显升高,有统计学意义(P<0.05)。E2+I/R 24 h组、Pro+I/R24 h组和IPC+I/R 24 h组RIRI后RIA中Cx43蛋白表达与Control组比较,均有统计学意义(P<0.05)。E2+I/R 24 h组的RIRI后RIA中Cx43蛋白表达较Pro+I/R 24 h组降低,差异无统计学意义(P>0.05)。E2+I/R 24 h组的RIRI后RIA中Cx43蛋白表达与IPC+I/R 24 h组比较具有统计学差异(P<0.05)。结论:大鼠RIRI后RIA的Cx43表达水平增加,提示RIA的Cx43表达与RIRI可能具有相关性。E2、Pro及IPC预处理对RIRI的保护机制可能是通过降低RIA的Cx43蛋白表达水平改变RIA舒缩性来实现的,其中E2作用最强。