树突状细胞(DC)是一种功能最强的专职抗原提呈细胞(APC)，其对抗原进行捕获、加工，处理后提呈给MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子，诱导活性T、B淋巴细胞的增殖，在调节特异性免疫反应中起决定性作用。慢性丙型肝炎患者免疫功能低下是否与DC1的功能有关，目前鲜见报道。 为此，我们对18例慢性丙型肝炎患者及18位健康献血员外周血进行了DC1的分离、体外诱导培养及特异性DC1表面标志的测定，同时对患者淋巴细胞亚群及各项生化指标和病毒载量进行了检测，并对部分患者临床治疗前后的情况进行了比较，以期探讨慢性丙型肝炎患者外周血DC1体外培养的方法，探究DC1与慢性HCV感染之间的关系，为治疗慢性丙型肝炎DC1疫苗的研发提供线索。 结果显示，体外用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI1640完全培养基(加GM-CSF和IL-4)诱导人的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)来培养DC1，48h后，细胞出现增殖，在第5d加入TNF-α，发现可明显刺激DC1的成熟，到9d时，细胞增殖达到最大值，可诱导出大量的DC1。本实验发现在相同的培养条件下，虽然慢性丙肝患者的PBMC及健康人的PBMC中均可诱导产军医进修学陨顾士沦文 慢性丙型病毒性肝炎患者【型树突状细胞、淋巴细胞亚群的特点及临床意义生 DC，但是相比之下，健康人 DC的成簇聚集状态更加明显，细胞表面毛刺样突起更丰富，DC的终产量也更多，这些证据提示慢性丙肝患者存在着 DC的功能缺失。 通过流式细胞仪对健康人和慢性丙型肝炎患者 DC表面的免疫分子表达进行分析发现，表达于慢性丙型肝炎患者 DCI 表面的共束激分子（CD80、CD86、CDla）及 MHC－11类分子 门LA个R）的水平均明显降低（患者为 14．SZ士13．32％、18．68士13．76％、6．33土4．98％和 29．14士14．00％；正常人分别为76．46士12．25＊、S4．38士9．72％、89．56士8．96％和 92．47士9．34％），两组之间均有统计学上的显著差别。另外，本实验还对 DC的其他表面分子进行了检测，如：CD40、CD83等，结果与前面的实验相同。由此可见，慢性丙型肝炎患者 DC不仅在数量上比正常人低，而且其表面共刺激分子表达不成熟，预示其功能的缺失。由于患者血．清中 HCVRNA检测均为阳性，所以 DC的功能降低可能与 HCV活跃复制有关。 淋巴细胞亚群检测发现，患者CD4＊细胞较正常对照组升高（P＜0．001）、CDS”T细胞降低 （P＜．01），CD4／CDS比值高于健康人 b．001厂CD16“56”NK细胞低于健康人水平…＜O．ON。患者n钉CDSb例失调和CD81细胞降低提示其产生特异性CTL反应能力不足，同时其NK细胞比例也低于健康人，提示其特异性及非特异性抗病毒免疫功能均不能达到有效地清除病毒的水平。 2 军医进修学院硕士沦文 慢性丙型病毒性肝炎患者l型树突状细胞、淋巴细胞亚群的特点及临床意义 将患者的临床资料与其 DC结果进行分析发现，患者 ALT值与 DC数量及患者病毒载量与其 DC数量之间均存 在负相关趋势。由于慢性丙型肝炎患者“ 的功能缺夫， oL体的免疫系统不能有效地清除病毒，HCV的持续感染又 造成丙型肝炎的慢性化，进一步损害了患者的免疫功能。 怎样打破这样的恶性循环则是我们需要进一步研究的方 向。 我们对3例完成了6个月a－干扰素治疗的患者进行 了跟踪随访，发现 3例患者的 PBMC数及培养后 DC计数均 有不同程度的增高，同时其ALT指标及HCV病毒载量均有 下降，CD4’、CDS”T细胞有两例增高，CD4／CDS比值均升高。 结果提示，患者DC功能的提高，对增强其特异性CTL反应。 改善病情及清除病毒有帮助。 以上结果表明，在体外通过细胞因子诱导，从慢性丙 型肝炎患者的外周血 PBMC中，可以成功地培养 DC，使其 在体外培养中增殖成熟。但在慢性丙型肝炎患者中m 数 量的减少和功能的缺夫可能是HCV持续感染和产生免疫耐 受的重要原因之一。而HCV的持续感染又致使患者淋巴细 胞亚群发生变化，其n＊、NK细胞的下降又使机体清除 病毒的能力降低，加重了丙型肝炎的慢性化。患者的 DC 水平与其病毒载量之间存在负相关趋势。通过体外诱导培 养队 使其功能大幅度恢复再回输体内的方法己经在抗肿 瘤治疗及抗病毒方面进行了有益的实践。我们也希望通过 3军医进修学院硕士论文 慢性丙型病毒性肝炎患者1型树突状细胞、淋巴细胞亚群的特点及临床意义我们的研究为丙型肝炎患者的DC治疗进行有益的探索。