【摘 要】
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目的:检测细胞周期蛋白A1（CyclinA1）在肝细胞癌（HCC）中的表达,并分析其表达与患者临床病理特征及术后生存时间的关系;检测CyclinA1在HCC细胞株中的表达及其对细胞迁移和侵袭能力的影响,初步探讨CyclinA1影响HCC侵袭转移的分子机制;探讨CyclinA1在体内对HCC侵袭转移的影响。方法:应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）分别检
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目的:检测细胞周期蛋白A1（CyclinA1）在肝细胞癌（HCC）中的表达,并分析其表达与患者临床病理特征及术后生存时间的关系;检测CyclinA1在HCC细胞株中的表达及其对细胞迁移和侵袭能力的影响,初步探讨CyclinA1影响HCC侵袭转移的分子机制;探讨CyclinA1在体内对HCC侵袭转移的影响。方法:应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）分别检测9对新鲜HCC及相应癌旁非瘤组织中CyclinA1 mRNA和蛋白质的表达水平;应用组织芯片及免疫组织化学（IHC）方法检测284对HCC及相应癌旁非瘤石蜡包埋组织中CyclinA1的表达情况,分析其表达与患者临床病理特征的关系;Kaplan-Meier法针对随访资料完整的HCC患者进行术后生存分析;Western blot检测HCCLM3、QGY-7703和Huh7细胞中CyclinA1的表达,瞬时转染过表达质粒至上述前两株细胞中,瞬时转染小干扰（siRNA）至Huh7细胞中;采用划痕愈合实验和Transwell迁移及侵袭实验检测CyclinA1对肝癌细胞侵袭转移能力的影响;Western blot检测上述三株细胞中MMP2、MMP9、VEGF、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达变化;光学显微镜比较转染CyclinA1前后上述三株细胞形态的变化;构建动物模型,裸眼观察肺大体标本中转移瘤形成情况,HE染色后镜下统计肺转移结节的数量;IHC染色观察CyclinA1、VEGF和CD31的表达,并分析计算微血管密度（MVD）。结果:CyclinA1 mRNA和蛋白质的表达水平在9对新鲜HCC组织中均明显高于相应癌旁非瘤组织（mRNA:t=4.739,P＜0.01;蛋白质:t=12.69,P＜0.01）;CyclinA1在284例石蜡包埋组织HCC中的表达水平高于相应癌旁非瘤组织（z=-16.019,P＜0.001）;CyclinA1的表达水平与分化程度（χ~2=5.061,P=0.024）、TNM分期（χ~2=5.665,P=0.017）、肿瘤是否多发（χ~2=15.551,P＜0.001）、脉管侵犯（χ~2=4.906,P=0.027）、被膜侵犯（χ~2=4.559,P=0.033）和肿瘤大小（χ~2=6.652,P=0.010）有关;生存分析表明,CyclinA1高表达的HCC患者的术后总体生存时间和无病生存时间较低表达者更短（P均＜0.05）;在CyclinA1阳性表达、肿瘤直径≥5cm、被膜侵犯、脉管侵犯、肿瘤多发、分化程度差和复发转移的HCC患者中,CyclinA1高表达者的术后总体生存时间和无病生存时间较低表达者更短（P值均＜0.05）;Cox多因素回归分析表明,CyclinA1表达水平、分化程度、肿瘤是否多发、肿瘤大小是影响HCC患者术后总体及无病生存时间的独立预后因素（P均＜0.05）;过表达CyclinA1后,HCCLM3和QGY-7703细胞的迁移和侵袭能力明显增强（P均＜0.05）,敲降CyclinA1后,Huh7细胞的迁移和侵袭能力明显减弱（P均＜0.05）;在HCCLM3和QGY-7703细胞中,过表达CyclinA1上调MMP2、MMP9和VEGF的表达（P均＜0.05）,在Huh7细胞中,敲降CyclinA1下调MMP2、MMP9和VEGF的表达（P均＜0.05）;但在肝癌细胞中,过表达/敲降表达CyclinA1对Vimentin、N-cadherin和E-cadherin的表达水平无明显影响（P均＞0.05）,肝癌细胞的形态也无明显变化;CyclinA1过表达组的裸鼠均明显有肺部转移瘤的形成（P＜0.05）,CyclinA1过表达组肺转移结节的数量明显多于对照组（P＜0.05）;过表达CyclinA1上调了VEGF表达,并且MVD数量增多（P均＜0.05）。结论:CyclinA1可能在HCC的发生发展中发挥作用;高表达CyclinA1的HCC患者预后不良,可作为判断HCC患者预后的潜在分子标志物及潜在治疗靶点;体外实验表明CyclinA1可能通过上调MMP2、MMP9和VEGF的表达,进而增强肝癌细胞侵袭转移的能力,最终影响HCC的进展,而CyclinA1可能不影响上皮-间充质转化（EMT）;体内实验表明CyclinA1也促进HCC侵袭转移。
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