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[目的]侵袭转移是结肠癌患者高死亡率的重要因素之一,本课题基于“阴虚致瘤”的假说探讨滋阴方二至丸对结肠癌细胞增殖、周期、凋亡及侵袭转移的作用机理,为二至丸抗结肠癌增殖及侵袭转移提供科学依据,对提高患者生存率具有重要意义。[方法]1.细胞增殖实验:采用噻唑兰(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色法检测二至丸含药血清和奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)对结肠癌HCT116细胞增殖的作用。2.细胞周期、凋亡实验:(1)采用PI染色法检测药物对结肠癌HCT116细胞周期分布的影响;(2)采用Annexin V-FITC/PI染色法检测药物对结肠癌HCT116细胞凋亡的影响;(3)采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测药物对结肠癌HCT116细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达变化。3.细胞侵袭转移实验:(1)采用划痕实验检测药物对结肠癌HCT116细胞迁移的影响;(2)采用Transwell小室检测药物对结肠癌HCT116细胞侵袭能力的影响;(3)采用Western blot检测结肠癌HCT116细胞p65、p-p65、VEGFR1、E-Cadherin蛋白表达的变化;(4)采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)检测结肠癌HCT116细胞VEGFR1、CDH1基因表达变化。[结果]1.增殖实验结果显示:二至丸药物血清干预HCT116细胞12 h后,2.5%、10%浓度的药物血清对HCT116细胞的增殖具有显著的抑制作用(P<0.05);48 h后2.5%、5%、10%、20%浓度的药物血清对细胞有显著抑制作用(P<0.05);72 h后抑制作用减弱,只有10%药物血清对细胞有显著抑制作用(P<0.05)。2.细胞周期、凋亡实验:(1)周期实验结果显示:与空白对照组各期比较,L-OHP组和联用组将细胞阻滞在G1期(P<0.05),二至丸含药血清中、高剂量组将细胞阻滞在S期(P<0.05)。(2)凋亡实验结果显示:与空白对照组比较,各用药组均显著促进了细胞的凋亡(P<0.05),联用组细胞凋亡率最高(P<0.05)。(3)Western blot实验结果显示:与空白对照组比较,L-OHP组和联用组可以显著上调Bax蛋白表达(P<0.05),并且联用组比L-OHP组Bax蛋白表达显著升高(P<0.05)。与空白对照组比较,各用药组均显著下调Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。3.侵袭转移实验:(1)划痕实验结果显示:12h、24h:与空白对照组比较各用药组细胞迁移率均显著降低(P<0.05),并且联用组迁移率最低。36h、48 h:与空白组比较,除二至丸高剂量组,其余用药组细胞迁移率均显著降低(P<0.05),联用组迁移率最低。(2)Transwell实验结果显示:与空白对照组比较各用药组穿模细胞数均显著减少(P<0.05)。(3)Western blot实验结果显示:与空白对照组比较,二至丸含药血清中、高剂量组显著下调了p-p65、VEGFR1蛋白的表达(P<0.05),联用组比L-OHP组显著降低了p-p65、VEGFR1蛋白的表达(P<0.05);与空白对照组比较,L-OHP组和联用组显著上调了E-cadherin蛋白的表达(P<0.05),并且联用组比L-OHP组E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。(4)qPCR实验结果显示:与空白对照组比较,二至丸含药血清中、高剂量组显著下调了VEGFR1mRNA的表达(P<0.05),联用组比L-OHP组显著降低了VEGFR1 mRNA的表达(P<0.05);与空白对照组比较,各用药组对CDH1 mRNA表达没有显著影响。[结论]1.二至丸含药血清能够抑制结肠癌HCT116细胞的增殖。2.二至丸含药血清通过将细胞阻滞在S期改变结肠癌HCT116细胞的细胞周期分布,促进细胞的凋亡,并能协同L-OHP增加凋亡率,其机制可能与抑制Bcl-2蛋白的表达,增加Bax蛋白的表达有关。3.二至丸含药血清能够抑制结肠癌HCT116细胞的迁移和侵袭,其机制可能与下调p-p65、VEGFR1蛋白和mRNA的表达,协同L-OHP增加E-cadherin蛋白的表达有关。