【摘 要】
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肝细胞癌（HCC）是一种高死亡率的原发性肝癌,具有肝内转移的特性,可侵入门静脉及肝脏其他部位,导致术后复发,难以被彻底治愈。通过RNA干扰的方法可解决HCC转移和侵袭造成的肿瘤无法根治的难题,其中miR-148b是一种肝癌细胞转移侵袭的相关基因,在转移性的肝癌细胞中低表达,可对细胞癌的转移侵袭进行调控。但是游离的miR-148b静脉注射后易被血液中的血清核酸酶降解,且靶向性差,无法有效聚集在肿瘤部
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肝细胞癌（HCC）是一种高死亡率的原发性肝癌,具有肝内转移的特性,可侵入门静脉及肝脏其他部位,导致术后复发,难以被彻底治愈。通过RNA干扰的方法可解决HCC转移和侵袭造成的肿瘤无法根治的难题,其中miR-148b是一种肝癌细胞转移侵袭的相关基因,在转移性的肝癌细胞中低表达,可对细胞癌的转移侵袭进行调控。但是游离的miR-148b静脉注射后易被血液中的血清核酸酶降解,且靶向性差,无法有效聚集在肿瘤部位。为了解决上述问题,本文以从主动靶向,高效递送的角度出发,以纳米基因载体为突破口,构建还原响应性纳米基因系统用于靶向递送miR-148b,并重点考察纳米体系的还原响应性、肿瘤靶向性、生物相容性、防细胞转移和侵袭性等。旨在为miR-148b提供一种可主动靶向肿瘤的、高效低毒的递送系统,以期解决肝细胞癌转移和侵袭难题。本文以毒性较小的低分子量支化聚乙烯亚胺（BPEI）为原料,通过二硫键（-S-S-）交联制备了具有高分子量和高转染率的阳离子载体SSBPEI,同时为了提高SSBPEI的生物相容性和肿瘤靶向性,引入聚乙二醇（PEG）和CC9肽制备出CC9-PEG-SSBPEI纳米载体。CC9-PEG-SSBPEI可通过正负电荷吸引作用与miR-148b有效结合,形成CC9-PEG-SSBPEI/miR-148b纳米粒;zeta电位分析和凝胶阻滞分析实验均证实CC9-PEG-SSBPEI能与miR-148b稳定结合,且能够保护miR-148b不被核酸酶所降解;DLS法测试该纳米粒的粒径,发现N/P比对纳米粒的粒径和分散度影响很大,当N/P=10:1时,粒径约为150 nm,纳米粒达到最佳状态;通过AFM和TEM图像发现纳米粒以球形均匀分散;此外,CC9-PEG-SSBPEI/miR-148b纳米粒具有还原响应性,可在GSH/DTT环境下降解并释放出miR-148b;通过流式细胞术及激光共聚焦显微镜观察发现,CC9-PEG-SSBPEI可促进Hu H-7细胞对miR-148b的摄取,证实该纳米体系对Hu H-7肝癌细胞具有靶向性;通过q RT-PCR分析法发现CC9-PEG-SSBPEI可提高miR-148b在Hu H-7细胞中的表达量,并有效地抑制了Hu H-7细胞中NRP-1基因的表达;划痕实验及Transwell迁移分析法研究发现CC9-PEG-SSBPEI/miR-148b能够有效抑制Hu H-7细胞的转移,侵袭及生长。更重要的是,CC9-PEG-SSBPEI/miR-148b的具有较低的溶血率（<5%）,MTS法发现CC9-PEG-SSBPEI具有良好的细胞相容性。综上所述,本文所构建的CC9-PEG-SSBPEI/miR-148b的纳米基因递送系统可有效解决miR-148b递送过程出现的易降解、靶向性差等问题,有望为肝细胞癌基因调控疗法提供潜在的基因递送载体。
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