【摘 要】
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本文对莽草酸基因工程菌的构建进行了探讨。本研究以Ecoli DH5a基因组为模板克隆莽草酸激酶基因，适当酶切后分别插入两端带有FRT位点的卡那霉素抗性基因，得两个质粒pMD—aroL：：ka
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本文对莽草酸基因工程菌的构建进行了探讨。本研究以Ecoli DH5a基因组为模板克隆莽草酸激酶基因，适当酶切后分别插入两端带有FRT位点的卡那霉素抗性基因，得两个质粒pMD—aroL：：kan和pMD-aroK：：kan，经EcoR I、Pst I双酶切得到基因打靶DNA片段，利用质粒pKD46编码的Red重组系统，用打靶DNA片段的kan及两端的基因同源序列替换大肠杆菌ToplOF基因组上的莽草酸激酶基因，再运用质粒pCP20编码的FLP重组酶消除基因组上的筛选标记kan基因。PCR及Southemblot证实基因敲除是成功的，测序结果表明基因敲除成功且kan已经从基因组上消除，摇瓶发酵显示构建的基因工程菌的莽草酸产量是原始菌株的2.03倍。
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