小窝蛋白-1对A549细胞磷酸胆碱二胞苷酰转移酶的影响及作用机制初探

来源 :湖南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiangjunaiai
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目的:观察小窝蛋白-1(caveolin-1)对A549细胞磷酸胆碱二胞苷酰转移酶(CTP)表达的影响;探讨核因子κB(NF-κB)信号转导途径在磷酸胆碱二胞苷酰转移酶合成中的作用,为临床有关呼吸系统疾病的研究提供依据和参考。  方法:以研究肺表面活性物质常用的A549细胞作为研究对象,运用小分子RNA干扰(siRNA)的方法构建小窝蛋白-1低表达模型;并用蛋白印迹法(western blot)检测小窝蛋白-1的表达变化;实验分组如下:①按量效关系分组:siRNAN浓度为1.0μmol/l、3.0μmol/l、5.0μmol/l;②按转染时间分组:0h组、24h组、48h组、72h组;③选取5.0μ mol/l的siRNA,转染时间为72h分组:为转染试剂组,siRNA处理组,错义链RNA组;④按小窝蛋白-1对磷酸胆碱二胞苷酰转移酶表达影响分组:转染试剂组(正常对照组),siRNA处理组(实验处理组),错义链RNA组(阴性对照组);⑤NF-κB表达分组:转染试剂组,siRNA处理组,错义链组;其他实验条件均相同。之后对其进行总蛋白的提取,随后蛋白印迹法检测磷酸胆碱二胞苷酰转移酶的表达;最后对核蛋白进行提取并检测核蛋白P65的表达。  结果:  1.浓度分别为1.0μmol/l,3.0μmol/l,5.0μmol/l的siRNA孵育细胞后,5.0μmol/l的siRNA与1.0μmol/l的siRNA条带相比小窝蛋白-1的表达降低。  2.于0h,24h,48h,72h分别孵育细胞后,72h组与0h组相比小窝蛋白-1的表达降低。  3.5μmol/l siRNA,转染细胞72h,小窝蛋白-1表达下降,转染组与错义链组相比,小窝蛋白-1的表达降低。  4.蛋白印迹法检测磷酸胆碱二胞苷酰转移酶表达下降;转染组相对错义链组小窝蛋白-1的表达明显降低。  5.提取A549细胞核蛋白后蛋白印迹检测胞核蛋白p65,胞核蛋白p65表达下降。转染组相对错义链组p65表达明显降低。  结论:  1.小窝蛋白-1低表达模型构建成功。  2.小窝蛋白-1的表达减少可引起磷酸胆碱二胞苷酰转移酶的表达下降。  3.胞核P65表达下降,提示小窝蛋白-1下降引起磷酸胆碱二胞苷酰转移酶表达减少与NF-κB的活化减少有关。
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