【摘 要】
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RNA干预(RNA interference,简称RNAi)是双链RNA引发的、通过特异性的降解与之序列同源的基因的mRNA而抑制该基因功能的现象,广泛存在于植物,线虫,真菌,昆虫,原生动物和鼠等物
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RNA干预(RNA interference,简称RNAi)是双链RNA引发的、通过特异性的降解与之序列同源的基因的mRNA而抑制该基因功能的现象,广泛存在于植物,线虫,真菌,昆虫,原生动物和鼠等物种中,在斑马鱼中也有报导.我们分别用来源于母体基因pouⅡ-1,转基因GFP和内源基因terra内含子序列的双链RNA研究了RNAi在斑马鱼中的作用和机制.我们发现,用每枚胚胎7.5pg(pg/e)以上剂量的所有三种类型的双链RNA注射过的胚胎,从原肠作用开始发育缓慢,并在其后的发育时期产生复杂的缺陷表型;但中囊胚期之前,即使用较高浓度(如150pg/e)的双链RNA注射,胚胎也没有明显的异常.我们还发现,RNAi引起的胚胎发育的异常程度依赖于注射的双链RNA的剂量.用7.5pg/e到30pg/e的GFP双链RNA注射GFP转基因的斑马鱼胚胎,能够引起胚胎发育的缺陷,但是并不能完全抑制GFP的表达.同时注射GFP mRNA (150pg/e)和各种双链RNA(75 pg/e),都可以在囊胚期以后观察到GFP表达的减弱,这说明双链RNA对基因表达的影响发生在转录后水平上.全胚胎RNA原位杂交实验发现,不同来源的双链RNA都可以非特异性地导致共注射的外源mRNA和内源mRNA的降解.因此,双链RNA干预不适合用做研究斑马鱼基因功能的工具.虽然我们的结果与以前在斑马鱼上得到的结论差别很大,但是与干扰素介导的细胞抗病毒反应理论和最新的RNAi研究进展是相符的.
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