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研究背景与目的:白血病是一种常见的起源于造血前体细胞的恶性肿瘤,在我国发病率较高,目前主要的治疗方法为造血干细胞移植和化疗。化疗药物多为人工合成,毒副作用较大,因此迫切需要治疗效果好、毒副作用小的药物。中药作为我国传统治疗白血病的手段,具有个体化、辩证施治的明显优势,实践证明中医中药在治疗白血病中显示出重要作用。胡桃醌(juglone)是存在于胡桃科植物及其同属植物黑核桃中的主要活性物质,主要用于抗肿瘤治疗。许多国家和地区把胡桃楸皮作为抗癌验方应用,但胡桃醌对白血病细胞增殖有何作用尚缺乏深入研究,确切的作用机制也不清楚。本研究将观察胡桃醌对5种人白血病细胞系增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用,目的是探讨胡桃醌在白血病治疗中可能的应用价值。研究方法:观察胡桃醌处理的K562细胞的形态学改变;MTT法检测胡桃醌对白血病K562、Jurkat、U937、U266及NB4细胞增殖的抑制作用;Annexin V/PI双染流式细胞术检测胡桃醌处理对K562细胞凋亡的诱导作用;免疫印迹检测胡桃醌对K562细胞Bcl-2蛋白表达的影响。研究结果:1.细胞形态学观察:倒置显微镜下观察可见对照组K562细胞呈悬浮生长,状态良好,细胞密度均一,大小一致,轮廓清晰。低浓度胡桃醌处理K562细胞24h后,细胞密度稀疏,细胞体积缩小,大小不一,轮廓不清,折光性差;高浓度胡桃醌处理的K562细胞可见细胞碎片,表明细胞生长受到抑制。2.MTT法检测结果显示:胡桃醌处理对白血病K562、Jurkat、U937、U266及NB4细胞的增殖均有较强的抑制作用,其中对Jurkat和U266细胞的抑制效果最为明显,对K562、U937及NB4白血病细胞的半数抑制浓度(IC50)均小于40mg·L-1,且随着胡桃醌浓度增加和处理时间的延长,作用更为明显,呈现浓度和时间依赖性。3.Annexin V/PI双染流式细胞术检测显示:随着胡桃醌浓度的增加,K562细胞凋亡比率逐渐升高。1、2、4、8和16mg·L-1胡桃醌作用6h,凋亡率(%)分别为(4.54±0.6)、(11.54±0.6)、(28.7±0.3)、(45.0±1.2)和(76.1±1.4),明显高于对照组(P<0.01),表明胡桃醌处理可以诱导K562细胞发生凋亡,且随着胡桃醌浓度的增加促进凋亡的作用更强,提示胡桃醌对白血病细胞增殖的抑制作用可能是由于胡桃醌促进白血病细胞凋亡。4.蛋白免疫印迹显示:胡桃醌能下调K562细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达。结论:1.细胞形态学观察表明,胡桃醌能抑制K562细胞生长。2.胡桃醌对白血病K562、Jurkat、U937、U266、NB4细胞系增殖均有较强的抑制作用,并呈浓度和时间依赖性;胡桃醌对Jurkat和U266细胞增殖的抑制效果最为明显。3.胡桃醌能诱导白血病K562细胞发生凋亡,且随着胡桃醌浓度的增加促凋亡的作用增强。4.胡桃醌能下调K562细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达,表明胡桃醌能诱导细胞凋亡。这些研究结果提示,胡桃醌可能是白血病有用的治疗剂。