论文部分内容阅读
目的研究IL-15、IL-21体外培养人细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）的作用。方法分离健康志愿者外周血单个核细胞，对照组使用CIK细胞常规培养基（抗CD3-McAb，IL-2，IFN-γ等细胞因子），在常规CIK细胞培养基中分别加入IL-15或/和IL-21，即IL-15组、IL-21组及联合组，体外诱导培养10天：1、血球计数板苔盼蓝拒染法分析细胞增殖数量和活力；2、流式细胞术直接免疫标记CD3、CD4、CD8、CD56；3、ELSIA法检测CIK细胞分泌的IFN-γ、TNF-α、IL-12细胞因子；4、CIK细胞与食管癌细胞株EC9706共培养：①CCK-8法分析CIK细胞对食管癌细胞株EC9706细胞毒性作用；②AnnexinV-FITC凋亡试剂盒检测CIK细胞对食管癌细胞株EC9706细胞的凋亡影响。结果1、细胞数量对照组（7.83±1.18）×105个/ml，IL-15组（26±9.86）×105个/ml，IL-21组（14.58±1.81）×105个/ml，联合组（11.53±1.70）×105个/ml，各实验组CIK细胞数量均高于对照组（P<0.05），且IL-15组细胞数量高于IL-21组和联合组（P<0.05）。2、CIK细胞表型①IL-15组和IL-21组CD3+表达多于对照组（P<0.05），联合组CD3+细胞比值和对照组相比差异无统计学意义；②IL-15组和IL-21组CD3+CD4+细胞比值高于对照组（P<0.05）；③各实验组CD3+CD8+细胞比值均多于对照组（P<0.05）；④联合组CD3+CD56+细胞比值高于对照组（P<0.05），同时也高于IL-15组（P<0.05）。3、细胞培养上清中细胞因子①IL-15组细胞培养上清液中IFN-γ浓度高于对照组（P<0.05），且IL-15组高于联合组差异有统计学意义（P<0.05），IL-21组和联合组细胞培养上清液中的IFN-γ浓度和对照组相比，差异无统计学意义；②IL-15组和IL-21组细胞培养上清液的TNF-α浓度高于对照组（P<0.05），联合组细胞因子低于对照组（P<0.05）。4、CIK细胞与食管癌EC9706细胞共培养后抑制率IL-15组（26.56±11.2）%，IL-21组（8.56±3.12）%，联合组（18.41±8.72）%，每两组之间比较差异有统计学意义（P<0.05）。5、凋亡检测IL-15组（19.11±4.39）%、IL-21组（14.99±2.53）%及联合组（18.25±3.95）%与对照组（13.66±2.24）%相比，IL-15组和联合组肿瘤凋亡率高于对照组及IL-21组（P<0.05）。结论1、IL-15、IL-21单独及联合应用均能促进CIK细胞的增殖，且IL-15对CIK细胞体外培养的增殖作用优于IL-21和两者联合。2、单纯IL-15可增加CIK细胞表面CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+分子的表达；单纯IL-21可提高CIK细胞表面CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+分子表达；两者联合可提高CD3+CD8+及CD3+CD56+分子表达，优于单纯应用IL-15和IL-21诱导的作用。3、单纯IL-15可增加CIK细胞分泌IFN-γ及TNF-α细胞因子，单纯IL-21可增加CIK细胞分泌TNF-α细胞因子，而IL-15联合IL-21不利于IFN-γ和TNF-α细胞因子的产生。4、IL-15、IL-21及两者联合能增强CIK细胞对食管癌细胞株EC9706细胞杀伤效应，且IL-15及IL-15联合IL-21的细胞杀伤效应更优于IL-21。