利用酒糟培养裂殖壶菌高值化生产DHA的发酵工艺研究

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裂殖壶菌(Schizochytrium)是富含二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)的海洋微藻,高昂的生产成本限制其广泛应用。探索DHA低成本生产策略是加快其工业化生产发展的重要战略。我国白酒酒糟年产量高但利用度低,堆放会造成环境污染。本文利用酒糟替代传统培养基氮源,建立裂殖壶菌低成本发酵新工艺,探究了发酵废液循环利用的可行性并确定非灭菌发酵工艺条件,研究内容及结果如下:(1)以酱香型白酒酒糟为研究材料,经预处理作为裂殖壶菌培养基氮源,探究酒糟处理液替代传统培养基氮源对裂殖壶菌发酵生产DHA的影响。将酒糟处理液与商品化氮源胰蛋白胨、酵母粉和牛肉膏对比,发现仅在胰蛋白胨条件下裂殖壶菌生物量比酒糟处理液高26.28%。基于裂殖壶菌在酒糟处理液与胰蛋白胨培养条件下的脂质形态对比和游离氨基酸成分分析确定酒糟处理液作为Schizochytrium sp.S31培养基氮源的可行性。通过单因素试验进行发酵工艺参数优化,确定最优发酵工艺条件为酒糟干物质与水比例为1:9,葡萄糖添加量为70 g·L-1,发酵温度为28℃,酒糟处理液添加量为70%,初始p H为7.0,在此条件下摇瓶培养生物量可达22.14 g·L-1,油脂产量为8.88 g·L-1,DHA产量为2.85 g·L-1。(2)探究发酵废液添加量及循环次数对Schizochytrium sp.S31生长及DHA合成的影响。在废液添加量均为15%时,三次循环生物量分别为27.97 g·L-1、25.15 g·L-1和20.92g·L-1,确定最佳循环条件为添加废液15%进行一次循环,DHA产量达到4.27 g·L-1,与未进行废液循环相比提高33.26%。在7.5 L搅拌发酵罐中进行补料分批发酵试验,在发酵108 h时生物量和油脂产量同时达到最大,分别为63.46 g·L-1和27.23 g·L-1。该方法在降低废液处理成本的同时提高了DHA的生产效率,为发酵废液的资源化利用提供了新的思路。(3)探究以酒糟处理液为培养基氮源条件下的非灭菌发酵工艺。鉴于裂殖壶菌具有可在高盐浓度培养基中活跃生长的特点,对海水晶浓度和接种量进行优化以减少杂菌污染,确定最佳条件:海水晶浓度为47.5 g·L-1、接种量为15%。将灭菌条件与优化后非灭菌条件下Schizochytrium sp.S31的生物量、油脂产量和脂肪酸品质进行对比,在非灭菌条件下DHA产量为2.71 g·L-1,与灭菌条件下相比仅降低0.05%。结合微生物群落分析确定Schizochytrium sp.S31在发酵过程中的优势地位,为实现通过非灭菌发酵降低能源损耗提供理论依据。
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