救必应为冬青科冬青属Ilex L植物铁冬青Ilex rotunda Thunb.的干燥树皮,是岭南地区常用草药,收载于2015版中国药典。其味苦、性寒,具有清热解毒、凉血止血、消肿止痛、祛风利湿的功效。化学成分研究表明救必应中主要含有三萜类、苯丙素类、黄酮类成分,其中三萜类成分为其主要活性成分。现代药理研究表明其具有心血管和抑菌抗炎方面的药理作用,临床常用于治疗心血管疾病和各种感染性疾病。本课题从化学成分体内过程分析着手,探讨救必应发挥药效的物质基础及作用机制。首先采用UPLC-TOF-MS/MS法对救必应的主要化学成分进行定性分析,借助高分辨质谱仪提供的化合物精确相对分子质量,结合对照品对照、色谱保留时间和一、二级质谱等信息,从救必应70%乙醇提取物中共鉴定和推断出40个化学成分,包括36个三萜类成分和4个苯丙素类成分,初步明确救必应提取物中的主要化学成分。通过体内-体外物质组关联分析正常大鼠灌胃救必应提取物后血浆、尿液、粪便中的原型成分,结果分别从大鼠血浆、尿液及粪便中鉴定了24、36、38个原型成分。在此基础上,本课题选取了6个在原药材及含药血浆中浓度相对较高的代表性三萜类化合物,研究救必应吸收入血的三萜类成分的药代动力学行为。实验建立了大鼠血浆中铁冬青酸、长梗冬青苷、冬青素A、Rotundinoside C、冬青苷O、Rotudanonic acid的定量分析方法,并应用于大鼠灌胃给予70%乙醇提取物后6个成分的药代动力学研究。以地高辛为内标,采用甲醇沉淀蛋白法处理血浆样本。色谱条件:ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7μm）;乙腈（A,含0.1%甲酸）-水相（B,含0.1%甲酸）梯度洗脱,流速为0.4 m L/min,柱温为40°C,进样量为5μL。质谱条件:ESI离子源负离子模式检测,离子源温度为550°C,雾化气为55psi,加热气为55 psi,气帘气为35 psi,离子喷射电压为-4500 V,去簇电压为100 V。碰撞能为5 e V,子离子扫描模式分别采集m/z 487.34（铁冬青酸）、m/z 695.40（长梗冬青苷）、m/z 501.32（冬青素A）、m/z 1119.57（Rotundinoside C和冬青苷O）、m/z 531.30（Rotudanonic acid）、m/z 779.43（地高辛）的子离子,其他参数均采用仪器默认值。所测的6个成分在测定浓度区间线性关系良好（r≥0.990 1）,批内精密度的RSD均小于12.4%,批间精密度的RSD均小于13.5%,提取回收率和基质效应分别在81.2%～98.2%和81.3%～112.5%之间。该方法均简便易行、准确可靠、重现性较好,可以应用于救必应三萜类组分在大鼠体内的药代动力学研究。此外,本课题从上述6个三萜类成分中选取了入血含量最高且活性较好的成分铁冬青酸开展了体内过程的研究,考察其在大鼠体内的代谢情况。结果从大鼠灌胃给予铁冬青酸后的血浆、尿液、粪便中共鉴定了11个代谢产物,主要为I相的氧化及甲基化代谢产物和II相的硫酸化、葡萄糖醛酸化代谢产物。为确定部分代谢产物的结构,还采用微生物转化辅助体内药物代谢物鉴定的研究方法,从包括多型孢毛霉、密丛毛霉、总状共头霉、小克银汉霉、梅林青霉、黑曲霉等在内的14种霉菌中筛选出总状共头霉AS 3.264作为转化菌株,对铁冬青酸进行微生物转化,并与体内代谢情况进行比较分析,结果从微生物转化样品中鉴定了6个代谢产物,其中3个代谢产物与大鼠体内代谢产物一致,并通过多种色谱方法从微生物扩大培养样品中分离制备得到3个大量的转化产物。采用波谱法鉴定了其结构,据此辅助鉴定了部分体内代谢产物的化学结构。其中rotundien A为新化合物,rotundanonic acid和ilexolic acid A为首次从微生物转化中分离得到的化合物。