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目的:趋化因子(chemokines)是细胞因子(cytokines)家族中的一员,常表达于肿瘤细胞及某些非免疫细胞表面,对嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞等具有趋化和激活作用。有研究表明,在多种肿瘤细胞中均存在白细胞介素8的过表达,不但有利于新生血管的形成,还能够影响肿瘤细胞的侵袭和转移能力。白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8),又称为趋化因子CXCL8,结合其受体CXCR1/2,诱导炎性细胞聚集到损伤部位,促使胞内信号通路活化,进一步推进肿瘤发生发展的进程。iP10是我们实验室将IP10和CXCL8突变体杂交得到的一种无生物学活性的CXCR1/CXCR2竞争性拮抗剂,对CXCR1/2的亲和力高于CXCL-8,可竞争性抑制包括CXCL-8在内的多种细胞因子与CXCR1/2的结合,阻断其生物学功能,抑制新生血管形成,阻碍肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。顺铂是一种临床常用的抗肿瘤药物,对头颈部,肺部,卵巢,乳腺等多种实体瘤均有显著疗效。然而它在具有高效抗肿瘤作用的同时对机体正常细胞产生的毒副作用也是不可小觑的,其中以肾毒性最为严重。本实验采用iP10、顺铂单独治疗及二者联合治疗肝癌的方式,探讨iP10对肿瘤发生发展及顺铂导致肾损伤的影响,为肿瘤的临床治疗提供理论依据。方法:(1)动物模型的构建:BALB/C小鼠背部皮下(近颈侧)接种H22细胞1*106个/ml。,密切观察小鼠精神状态的变化。接种H22肝癌细胞7天后,将小鼠随机分为5组,分别为肿瘤对照(control)组、iP10(before)组(接种H22细胞时开始给药)、iP10组、DDP组和DDP+iP10组,每组16只小鼠。给予iP10(before)组、iP10组和DDP+iP10组小鼠iP10治疗(剂量:500μg/kg;方式:背部皮下注射);1/2h之后,给予DDP组和DDP+iP10组小鼠DDP治疗(剂量:12.5mg/kg;方式:单次腹腔注射)。之后的治疗iP10隔天注射,其余各组注射等量生理盐水。并且随时监测小鼠的肿瘤生长情况,记录肿瘤体积。(2)标本采集:于接种H22肝癌第11天(即用药第五天),各组处死8只小鼠,剥离小鼠双侧肾脏及其肿瘤组织。于接种后第15天(即用药第九天),处死各组剩余小鼠,每组8只,剥离实体瘤组织,称重并拍照。(3)对肿瘤重量及肿瘤抑瘤率进行计算和统计学分析,比较不同组肿瘤生长速度的差异。(4)应用H&E染色法检测肿瘤组织中细胞状态,免疫组织化学法(IHC)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测肿瘤组织中VEGF、EGFR、MMP-2等肿瘤相关蛋白的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肿瘤组织中IL-8和VEGF的表达量,观察不同治疗方案对肿瘤生长的影响。(5)应用H&E染色法检测肾组织中肾小球及肾小管的改变,PCR检测炎性因子IL-1β、MIP-2的表达及髓过氧化物酶(MPO)活性进一步研究iP10对顺铂导致的肾损伤的影响。结果:1.动物体内实验结果表明,DDP+iP10组肿瘤重量明显低于其他各组,能最大程度的抑制肿瘤生长;DDP+iP10组小鼠肿瘤生长速度缓慢,抑瘤率为67.90%±0.16,明显高于DDP(32.88%%±0.11)、iP10(37.96%±0.10)、iP10(before)(42.42%±0.10)(P<0.05)。2.肿瘤组织病理学结果表明,iP10(before)组、iP10组、DDP组和DDP+iP10组均存在不同程度的肿瘤组织坏死现象,其中iP10联合顺铂组肿瘤组织呈大面积坏死。3.免疫组织化学法结果显示,iP10联合顺铂能够减少肿瘤组织中CXCR1、CXCR2、VEGF、EGFR和NF-κB的表达。4.Western blotting结果发现,肿瘤相关蛋白VEGF、EGFR,MMP-2和NF-κB蛋白在iP10联合顺铂组中表达量较其他各组有明显的降低,且差异具有统计学意义(P<0.05)。5.酶联免疫吸附实验检测肿瘤组织中IL-8和VEGF的表达,结果表明iP10联合顺铂能够明显降低肿瘤微环境中IL-8和VEGF的表达,对肿瘤生长起到显著的抑制作用。6.从肾组织病理学检测结果来看,iP10能够减轻顺铂治疗导致的肾组织损伤程度。7.PCR检测肾组织中炎性因子IL-1β、MIP-2的表达,结果表明与单独应用DDP组相比,iP10联合顺铂能够明显降低肾组织中IL-1β和MIP-2的表达,减少肾组织中性粒细胞的浸润。8.检测肾组织中髓过氧化物酶(MPO)活性可见,iP10联合顺铂治疗后小鼠肾组织MPO活性明显较DDP组有所降低,表明iP10能够抑制小鼠肾组织中性粒细胞的聚集和浸润。结论:(1)iP10与顺铂联合用药能够明显抑制H22肿瘤的生长,并且其抑制作用明显强于单独应用iP10和DDP,但提前应用iP10与正常应用iP10相比无统计学意义。(2)iP10能够明显减轻顺铂治疗导致肾损伤。相比于单独用药组,iP10与顺铂联合治疗能够减轻小鼠肾组织病理损伤,减少IL-1β、MIP-2等炎性因子的表达,减少肾组织中性粒细胞浸润,延长小鼠的生存时间,提高小鼠的生命质量。