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随着口腔正畸治疗中的各种矫治技术和方式不断发展和完善,矫治方案逐步优化,但正畸治疗时间长以及正畸治疗过程中的不适感依然是广大正畸患者面临的问题。正畸牙移动依赖于正畸力作用下的牙周组织改建,骨组织改建在这个过程中尤为重要,如何缩短正畸治疗时间,加快正畸牙移动速度成为近年来正畸治疗研究热点之一。同样的,在牙周炎发展进程中,牙槽骨的丧失会导致牙齿脱落,如何减缓牙槽骨的破坏在牙周炎治疗过程中也是一个迫切需要解决的问题。人牙周膜成纤维细胞(Humans periodontal ligament fibroblast,HPLF)位于牙槽骨与牙骨质之间,具有区别于牙龈成纤维细胞的成骨性,同时作为牙周膜细胞的主要成分,可以通过分泌多种细胞因子参与牙周组织的代谢及改建。近年来发现ephrin/Eph信号通路在骨组织改建过程中发挥重要作用,其在牙槽骨改建中的作用机制也逐渐成为研究热点。ephrin/Eph在炎症状态下的牙周膜成纤维细胞中的表达状况研究较少。TNF-α是最重要的炎症因子之一,对TNF-α作用下牙周膜成纤维细胞中ephrin/Eph的表达,以及ephrin/Eph与其他通路之间关系的进一步研究可以为正畸治疗及牙周炎治疗中牙槽骨改建的调控提供参考。目的:1.检测牙周膜成纤维细胞在不同剂量TNF-α刺激下ephrinB2、EphB4、EphA2 mRNA和蛋白表达水平的变化,以了解TNF-α在牙槽骨改建过程中的细胞和分子机制。2.检测牙周炎牙龈组织EphB4表达量,进一步了解牙周炎牙槽骨吸收过程中的分子机制。方法:1原代牙周膜成纤维细胞培养:牙周膜组织来源于因正畸需要拔除的正常牙,通过组织块法进行分离培养,观察其生长状况及形状特点,通过免疫组织化学方法进行牙周膜成纤维细胞的检测。2用0.1ng/ml-1000ng/ml浓度的TNF-α分别处理人牙周膜成纤维细胞24h、48h,通过RT-PCR及Western blot检测ephrinB2,EphB4,EphA2在mRNA水平的表达及ephrinB2与EphB4在蛋白水平的表达。3取健康人牙龈组织及牙周炎患者牙龈组织各10例,通过免疫组织化学方法检测EphB4在健康人及牙周炎患者牙龈组织中的表达差异。结果:1成功培养出原代人牙周膜成纤维细胞,传代后人牙周膜成纤维细胞生长较快,免疫组织化学方法检测,波形丝蛋白阳性,角蛋白阴性。2同浓度TNF-α作用24h后,ephrinB2与EphB4 mRNA表达量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);EphA2 mRNA表达量与对照组无明显差异。作用48h后,0.1ng/ml TNF-α使EphB4 mRNA表达量增加(P<0.05),对ephrinB2/EphA2 mRNA表达量无影响;1ng/ml TNF-α作用下,ephrinB2/EphB4/EphA2 mRNA表达量均与对照组无明显差异;10ng/ml,100ng/ml,1000ng/ml TNF-α作用后,ephrinB2/EphB4表达量下降,EphA2表达量增高(P<0.05)。0.1ng/ml,1ng/ml浓度TNF-α刺激24h后对ephrinB2/EphB4蛋白表达量无影响,10ng/ml-1000ng/ml浓度使表达量下降;0.1ng/ml TNF-α作用48h后使EphB4表达量上升,ephrinB2表达量无明显变化,1ng/ml作用后,ephrinB2/EphB4表达量均无明显变化,10ng/ml-1000ng/ml刺激后ephrinB2/EphB4表达量均下降。3牙周炎组EphB4表达量与对照组相比明显降低,差异有统计学意义(p<0.01)。结论:1本实验成功培养出原代牙周膜成纤维细胞,组织块法原代培养人牙周膜成纤维细胞较其他方法操作简单,但成功率较低,对培养条件要求较高。2随时间与TNF-α浓度变化,ephrinB2,EphB4,EphA2表达量随之变化,且ephrinB2/EphB4在TNF-α作用下表达量并非均降低,低浓度的炎症因子可能对骨生成有正向作用。3在牙周炎患者牙龈组织中EphB4表达量下降,可能与牙周炎牙槽骨破坏相关。