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鸭瘟是由疱疹病毒引起的鸭、番鸭和鹅等水禽的一种急性烈性传染病,该病毒能引起不同年龄和性别的鸭致病,发病率和死亡率都很高,严重地影响了养鸭业的健康发展。本研究根据鸭瘟病毒包膜糖蛋白H(gH)基因序列设计三对引物,PCR扩增的基因片段分别定向插入到原核表达载体pET28,构建了三种原核表达质粒pET-gH、pET-gH1347和pET-gH1707,并转化宿主菌BL21 (DE3)。表达结果显示去除了gH跨膜区和信号肽的gH基因片段(pET-gH1347和pET-gH1707)获得了表达,而全基因片段(pET-gH)未获得表达。Western-blot表明两种表达产物均能与鸭瘟病毒阳性血清发生特异性反应。鸭瘟病毒gH蛋白的成功表达,将有助于开展该基因功能的研究和血清学检测方法的建立。用纯化gH蛋白作为包被抗原,建立了检测鸭瘟抗体的间接ELISA方法,并确定了ELISA最佳工作条件:抗原包被浓度为3μg/mL,4℃过夜,血清(1∶80)和二抗(1:500)分别在37℃温育1h、30min,底物溶液37℃显色10 min。经重复性试验、交叉试验、敏感试验等试验结果表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高。试验证明,gH ELISA是检测DEV特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。