吗啡胶体金免疫层析试纸条的研究与开发

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本文应用胶体金免疫层析技术进行吗啡(MOR)药物滥用的尿液及唾液检测研究。为了研制吗啡胶体金免疫层析试纸条,本研究利用吗啡偶联物抗原来制备单克隆抗体,采用微波加热方法制备20 nm胶体金,鉴定质量后标记单克隆抗体。将金标抗体喷涂在聚酯膜上,MOR-BTG包被在硝酸纤维素膜上,制成快速检测试纸条。首先本文在传统的微波加热法的基础上进行改进,制备胶体金。研究了不同的加热时间和还原剂对胶体金制备的影响,并将改进的微波法与传统微波法、电热套法和磁力搅拌法进行比较,结果表明,改进的微波法更适于制备单分散性小粒径的胶体金。本文还利用混合酸酐法将MOR和牛血清白蛋白(BSA)、牛甲状腺球蛋白(BTG)偶联,偶联物分别作为免疫抗原和包被抗原。再用免疫抗原MOR-BSA免疫得到抗吗啡单克隆抗体。最后通过比较不同的金标蛋白标记条件、不同的材料、聚酯膜上金标的喷涂量、抗原和二抗的包被浓度等对检测结果的影响,确立了最佳条件,成功建立了尿液和唾液联检吗啡的胶体金免疫层析方法。该法能在5分钟内完成对吗啡的检测,尿样和唾液的最小检测限分别为300 ng/ml、20 ng/ml,无需借助检测仪器;取样方便,检测时间段宽,适用于对吗啡进行现场快速检测。本研究也可为其它药物滥用检测试纸条的研究提供借鉴。
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