大鼠脑外伤后血脑屏障、超微结构变化及VEGF表达的研究

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目的 血脑屏障(blood brain barrier,BBB)是机体维持中枢神经系统内环境稳定的结构基础。本实验研究大鼠脑外伤后BBB变化规律和开放途径及VEGF—A与BBB关系。方法 参照Feeney’s自由落体致伤法,制作大鼠大脑顶叶局灶皮质挫裂伤模型。第一部分应用伊文氏兰((Evans Blue,EB)示踪,测定伤后1小时、3小时、6小时、12小时、1天、、3天、5天、7天、10天皮层和海马组织脑组织中EB含量;应用荧光显微镜观察BBB中间期双侧皮层和海马是否存在EB的渗出;应用硝酸镧示踪,在透射电镜下观察大鼠脑外伤后3小时,12小时,3天双侧海马区血管和内皮细胞超微结构水平的功能改变;第二部分采用免疫组化和免疫荧光的方法,应用VEGF-A,GFAP抗体检测伤后不同时间段大鼠脑冰冻切片。取伤后不同时间段损伤灶周围和同侧海马做VEGF-A实时反转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)。结果 ①损伤灶皮层和同侧海马在伤后1-6小时与伤后1—7天EB含量明显增多,高峰期在3小时和3天。伤后12小时,EB含量明显下降,但仍然高于对照组水平。损伤灶皮层和同侧海马EB含量分别在伤后10天和7天恢复正常。损伤灶皮层伤后3小时EB含量高于伤后3天。损伤灶同侧海马EB含量和伤后3小时相比没有差异。损伤灶对侧皮层和对侧海马EB含量和对照组相比没有差别。荧光显微镜下发现BBB中间期损伤灶同侧海马仍然存在EB的渗出。②伤后3小时和3天损伤同侧海马血管无断裂,硝酸镧扩散入血管周围组织间隙、血管基膜与胶
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