目的通过基因表达谱芯片筛选人血管紧张素原-肾素(Angiotensinogen-renin,AGT-REN)双转基因高血压小鼠肾脏差异表达基因,并通过进一步研究肾素抑制剂阿利克仑对AGT-REN双转基因高血压小鼠肾脏AT1、Mas和转录调节因子Ets1(E26transformation-specific-1,Ets1)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)及NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)、NOX4、诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,i NOS)的影响,探讨阿利克仑对高血压肾损伤发挥保护作用的作用机制。方法第一部分:1动物分组:3只10月龄雄性AGT-REN双转基因高血压小鼠为高血压组(HT组),3只背景相同的野生型C57B6小鼠作为正常对照组(WT组)。2动脉血压监测:采用无创尾套法测量各组小鼠平均动脉压(Mean artery pressure,MAP),观察各组小鼠连续29d内隔日血压的变化。3用小鼠全基因组基因芯片筛选AGT-REN高血压小鼠与WT小鼠相比肾脏的差异表达基因。4蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)验证基因芯片结果。第二部分:1动物分组及给药方法:12只10月龄雄性AGT-REN双转基因高血压小鼠随机分为高血压对照组(HT组)和阿利克仑治疗组(HT+Aliskiren组),每组6只,另选择背景相同的6只野生型C57B6雄性小鼠作为正常对照组(WT组)。通过腹腔注射给药,以20mg/kg/d对HT+Aliskiren组小鼠给予阿利克仑处理28天,其余两组给予等量生理盐水作为对照,期间监测血压,28天后取材,检测各项指标。2用光镜和电镜观察肾组织病理形态的变化。3 WB方法检测肾组织Ets1、OPN和RAS组分AT1、Mas受体及氧化应激指标NOX2、NOX4、i NOS的表达。结果第一部分:1 AGT-REN双转基因高血压小鼠血压:与WT组小鼠比较,HT组小鼠MAP明显升高。2芯片结果数据分析:(1)差异表达基因的筛选:用小鼠全基因组基因芯片从33696个基因中发现HT组小鼠与WT组小鼠相比肾脏的差异表达基因36个。其中在三组中均上调的基因有Ets1、OPN等20个,均下调的基因有Bcat1等16个。(2)基因芯片的生物学功能:分子功能分析中上调的基因有16个,下调的基因有9个;生物学途径分析中上调的基因14个,下调的基因7个;细胞组件分析中上调的基因14个,下调的基因7个。(3)基因芯片的通路分析:KEGG通路分析中发现差异表达基因主要参与了花生四烯酸代谢、脂肪酸代谢、肾细胞癌等生物过程。5基因芯片结果验证:Western blot结果显示Ets1、OPN表达水平明显升高,与基因芯片表达结果一致。第二部分:1血压:与WT组小鼠相比,HT组小鼠MAP明显升高;给予阿利克仑治疗后,HT+Aliskiren组小鼠MAP较HT组明显下降。2肾组织病理形态学结果:光镜下观察肾组织HE染色,WT组肾小球系膜基质无增生,间质无炎细胞浸润,肾小管结构正常,未见蛋白管型;HT组可见肾小球皱缩硬化,大部分毛细血管管壁增厚,可见玻璃样变,肾小管萎缩脱落,并可见蛋白管型,肾间质可见炎细胞浸润;HT+Aliskiren组上述病变明显改善。电镜下,WT组小鼠肾小球结构完整,结构清晰,肾小管上皮细胞线粒体丰富,排列整齐;HT组小鼠肾小球基底膜增厚,足突融合或消失,肾小管上皮细胞线粒体水肿、空泡变性,排列紊乱,间质可见大量胶原纤维形成;HT+Aliskiren组小鼠肾脏上述病变较HT组显著减轻。3 WB结果:与WT组比较,HT组小鼠肾脏转录因子Ets1、OPN及AT1受体表达明显升高,Mas受体表达明显降低,NOX2、NOX4、i NOS表达升高;HT+Aliskiren组较HT组,下调了Ets1、OPN及AT1受体及NOX2、NOX4、i NOS的表达,上调了Mas受体。结论1肾素-血管紧张素系统的激活可诱导多基因表达,参与高血压肾损伤的发生发展。2 AngⅡ-Ets1-OPN通路及AngⅡ-NADPH氧化酶信号途径参与高血压及高血压肾病的发生发展。3阿利克仑通过抑制Ets1、OPN的表达和氧化应激对高血压肾损伤起保护作用。