目的:t(8;21)急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia, AML)是一类异质性很大的血液系统恶性肿瘤,尽管标准化疗方案疗效较好,但仍有20～40%的患者不能达到完全缓解(complete remission, CR), 60%左右的患者最终复发[1],年轻患者5年生存率仅为40～45%,而老年患者小于10%[2],因此针对这类白血病的靶向治疗研究非常重要。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Histone Deacetylases Inhibitors, HDACi)是一类具有广泛抗肿瘤活性的小分子化合物,文献报道HDACi可抑制t(8;21)AML细胞增殖,诱导其凋亡、促进分化和阻滞周期[3],已进入白血病治疗的临床试验阶段[4]。西达本胺(Chidamide,CS055,爱谱沙(?)/Epidaza(?))是我国自主研发的选择性HDACi,本研究旨在观察西达本胺对t(8;21)AML细胞的作用,并初步探讨其作用机制。方法:本研究采用CCK-8、流式细胞技术检测西达本胺对AML1/ETO阳性及阴性AML细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。收集AML患者骨髓样本,用西达本胺处理原代AML细胞,观察其对细胞增殖的影响。筛选最佳西达本胺处理条件,并保证其浓度符合人体血药浓度范围,进行基因表达芯片筛查,通过蛋白免疫印迹实验对芯片结果进行验证,并观察西达本胺对AML1/ETO融合蛋白、C-KIT蛋白表达的影响。用MEK1/2特异性抑制剂U0126处理AML 1 /ETO阳性AML细胞,观察细胞增殖及对AML1 /ETO融合蛋白、C-KIT蛋白表达的影响。西达本胺处理AML1-ETO阳性AML细胞后,q-PCR检测其对AML1/ETO、C-KIT mRNA转录水平的影响。结果:1、西达本胺可有效抑制AML细胞增殖,且抑制作用呈浓度和时间依赖性。西达本胺通过诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期,对AML1/ETO阳性的AML细胞抑制率最高达70%以上,明显高于AML1/ETO阴性AML细胞。西达本胺可抑制原代AML细胞增殖,且抑制作用具有时间和剂量依赖性。2、利用基因表达芯片进行基因功能筛查。通过分子功能聚类分析发现,0.25μM西达本胺处理AML1/ETO阳性Kasumi-1细胞48h,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路相关基因发生了重要变化,MAPK家族的重要成员之一细胞外信号调节激酶1/2 (extracellμlar signal-regμlated kinase,ERK1/2)的主要分子功能是调控细胞增殖和凋亡等。ERK1/2通路参与细胞凋亡的基因有16个,提示西达本胺诱导AML1/ETO阳性细胞凋亡的主要分子通路可能是抑制ERK1/2 通路。3、蛋白免疫印迹实验结果显示,西达本胺作用于AML细胞后,下调ERK1/2通路的重要成员ERK1/2蛋白的磷酸化水平,且相对于AML1/ETO阴性AML细胞,西达本胺对AML1/ETO阳性AML细胞的作用更为明显,持续时间更长。在上调乙酰化组蛋白H3同时,下调AML1/ETO阳性细胞中AML1/ETO融合蛋白、C-KIT蛋白表达水平。4、西达本胺处理AML1-ETO阳性AML细胞后,与对照组相比,药物处理组AML1-ETO融合基因、C-KIT mRNA转录水平变化无明显统计学意义。5、U0126处理AML1/ETO阳性AML细胞后,可抑制其增殖,同时下调AML1/ETO、C-KIT的蛋白的表达水平,但对AML1/ETO、C-KITmRNA转录水平的影响不明显。结论:西达本胺可通过抑制ERK1/2信号通路中ERK1/2的磷酸化,进而通过诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期,抑制t(8;21)AML细胞增殖,同时降低AML1/ETO和C-KIT蛋白表达,为西达本胺在临床精准靶向治疗t(8;21)AML提供新的思路及理论依据。背景:随着联合化疗及造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT)方案的不断完善,AML的疗效明显提高,但仍有20～40%的患者不能达到完全缓解(CR),约50～70%获得CR的患者最终复发[1]。这类疾病的治疗成为白血病临床科研领域亟待解决的难题和热点。目的:对于难治/复发AML的治疗,NCCN指南推荐临床试验,《急性髓系白血病(复发难治性)中国诊疗指南2017年版》推荐的FLAG、CAG、HAA等方案在临床上取得一定的疗效,但对于危险分层预后不良、反复复发的患者尚需探索更有效的治疗方案。基于前期体内外实验室研究结果,我们组合了西达本胺联合DCAG(DCCAG)方案。本研究旨在分析难治/复发AML的临床特点,以及DCCAG方案对该类白血病患者治疗的有效性和安全性。方法:按WHO诊断、临床研究入组和排除标准筛选患者,入组患者予DCCAG方案治疗2周期。第1周期后疗效达到PR、CR的患者继续第2周期,疗效NR的患者由研究者判定是否进入第2周期治疗。治疗结束后4周完善相关检查评价近期疗效,疗效分为:CR、部分缓解(partial remission, PR)、未缓解(non-remission, NR); CR和PR患者数之和占患者总数的百分比为总反应率(overall response rate, OR )。同时观察患者的不良反应,血液学和非血液学不良反应均参照WHO药物不良反应分级。结果:1、入组情况:筛选入组43例患者,其中20例反复复发2次以上,1例造血干细胞移植后复发。按2016年NCCN危险度分层标准,预后不良13例(30.2%),预后中等16例(37.2%),预后良好5例(11.6%)。其中甲基化相关基因DNMT3A7例(18.4%)、IDH2 2例(5.2%)、TET2 2例(5.2%)。与不良预后相关的基因突变比例较高,FLT-ITD 11例(28.9%),RUNX1 7例(18.4%), GATA2 6 例(15.8%),TP53 2例(5.2%), ASXL1例(2.6%)。因病情需要28例(65.1%)接受过其它难治/复发AML方案治疗,11例(25.6%)接受过8周期以上化疗。2、疗效评价:退出4例,39例完成了疗效评价。近期总疗效:CR率41.0%(16/39),OR59.0% (23/39)。AML1/ETO 阳性 AML 的 CR 率 75.0% (1/4),预后良好组CR率100%。既往接受过其它难治/复发方案治疗的患者中,CR率36.0%(9/28), OR 52.0% (13/25);未接受过其它难治/复发方案治疗的患者CR率50.0%(7/14),OR71.4% (10/14)。既往使用过CAG方案的5例患者,CR4例;使用过DCAG的6例患者中,CR2例、PR1例;使用过FLAG方案的9例,CR4例。4、不良反应:以血液学毒性为主,60.5%的患者发生了与治疗相关的粒细胞减少,粒细胞缺乏(<0.5×109/L)持续时间16.5 (2-31) d。51.2%的患者发生了与治疗相关的血小板减少,血小板减少(<20×109/L)持续时间17 (2-48) d。共有5例患者死亡,2例死于疾病进展,1例死于败血症,1例死于肺部感染、呼吸衰竭,中位OS 45.5 (36-65) d。结论:本研究中,DCCAG方案治疗39例难治/复发AML患者,CR率41.0%,获得近60%的总有效率。在反复多次复发、耐药、有不良预后因素、既往接受过其它高效难治/复发AML方案治疗的患者中,OR 50%以上。主要不良反应为骨髓抑制和感染。初步研究结果表明,DCCAG方案对于临床上治疗难度非常大、预后很差的难治AML患者具有一定的疗效,为这类患者进行HSCT等进一步治疗争取了机会。这类患者骨髓造血功能差,免疫功能低下,粒细胞缺乏时间延长,感染的风险明显增大,需注意加强感染的预防及治疗。