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阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)是一种可以在人及动物肠道内寄生生存的革兰阴性菌,该菌可以引发新生儿脑膜炎、坏死性小肠结肠炎和菌血症等严重疾病,且感染后死亡率高达40%-80%,引起全球的广泛关注。研究发现,感染来源主要是受阪崎肠杆菌污染的奶粉,而克罗诺杆菌的传统分离方法存在一定的缺陷,高效的生物学及分子生物学技术的发展则对克罗诺杆菌菌种的检测和分型以及预防和治疗阪崎克罗诺杆菌的感染具有重要意义。食源性致病菌的耐酸特性也是其发挥其致病性的关键前提条件之一。目前,国内对其酸胁迫应答机制研究还鲜有报道。本文首先通过添加万古霉素、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷、头孢菌素和蔗糖等物质建立了一种优于DFI (Druggan-Forsythe-Iversen)和改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(mLST)的克罗诺杆菌分离方法,该方法、DFI和mLST方法对克罗诺杆菌的灵敏度分别为100%、87.5%和87.5%：而特异性分别为88.8%、77.7%和87.5%。然后,基于TaqI单酶切gluB基因片段进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,建立一种能鉴定克罗诺杆菌的同时还可以快速、准确地区分都柏林克罗诺杆菌(Cronobacter dublinensis),丙二酸盐阳性克罗诺杆菌(Cronobacter malonaticus),穆汀斯克罗诺菌(Cronobacter muytjensii)和阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)的种间特异性分子分型靶标技术。最后,本文探索性通过菌体接合方法成功建立了阪崎克罗诺杆菌的基因敲除方法,获得外膜蛋白OmpW突变株△OmpW和谷氧还蛋白GrxB突变株△GrxB,并通过耐酸性、形态特征和生物膜相关指标变化初步探讨OmpW、GrxB在阪崎克罗诺杆菌中耐酸变化中的作用,发现这两个基因与该菌的耐酸性有关,为进一步开展OmpW、GrxB在该菌致病中的作用机制提供参考数据。本研究的开展将为防控阪崎克罗诺杆菌生物污染及保障食品安全奠定基础。