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研究背景及目的:肿瘤微环境的两个重要特点是缺氧和富含胞外腺苷,是导致肿瘤免疫抑制、增殖恶化、发展转移的重要因素,与肿瘤患者的不良预后密切相关。缺氧通路的核心调控因子是乏氧诱导因子(HIF),其中乏氧诱导因子2α(HIF-2α)在肿瘤的发生、发展和转移中具有重要作用。腺苷通路中两个重要靶点包括腺苷生成的关键酶5’胞外核苷酸酶(CD73)、腺苷受体A2a(A2aR),与肿瘤发生、发展、免疫抑制具有重要联系。肿瘤新生血管生成是导致肿瘤增值、进展、转移的重要原因,而微血管密度(MVD)是评估肿瘤新生血管生成的重要指标。在非小细胞肺癌(NSCLC)中,HIF-2α、CD73、A2aR表达情况、临床意义及其相互关系尚不清楚,与肿瘤新生血管之间的关系尚未阐明。本研究应用免疫组化法检测HIF-2α、CD73、A2aR在NSCLC中的表达情况,免疫组化法测定MVD值,分析HIF-2α、CD73、A2aR表达情况及相关性、与临床病理特征的关系、与MVD关系和对预后的影响。研究方法:收集山东省医学科学院附属医院2008.06.01-2014.06.01期间NSCLC术后病理标本72例,应用免疫组化法检测HIF-2α、CD73、A2aR蛋白在NSCLC肿瘤组织中的表达水平,CD34标记血管内皮细胞进行肿瘤新生血管计数,测定MVD值,回顾性分析其与临床特征的关系和对预后的影响。收集山东省肿瘤医院2017年11月1日至2018年1月1日期间经手术切除的12例原发性肺腺癌患者的新鲜癌组织标本进行蛋白印迹分析。结果:1.HIF-2α主要表达在肿瘤细胞质中,部分胞核表达,阳性表达率66.7%(48/72);HIF-2α表达与高TNM分期(c~2=11.708,P=0.003),有淋巴结转移(c~2=16.457,P=0.000),高组织学分级(c~2=6.613,P=0.037)相关。2.CD73主要表达在肿瘤细胞膜上,部分胞质表达,阳性表达率70.8%(51/72),分析CD73表达强度,在不同TNM分期,III期强于I&II期(秩均值46.00>31.45),z=-2.931,P=0.003;有淋巴结转移强于无转移(秩均值44.57>30.74),z=-2.884,P=0.004。3.A2aR主要表达在肿瘤细胞膜上,部分胞质表达,阳性表达率54.2%(39/72),在女性(c~2=3.981,P=0.046),腺癌(c~2=5.469,P=0.019)中,A2aR高表达。4.分析肺腺癌western blot条带:HIF-2α蛋白表达在淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P=0.001),CD73蛋白表达在淋巴结转移组高于无转移组(P=0.0049),A2aR蛋白表达在淋巴结转移组和无转移组间未发现明显差异(P=0.6504)。5.72例NSCLC发现:HIF-2α阳性表达与CD73阳性表达之间具有正相关性(r=0.389,P=0.001),CD73阳性表达与A2aR阳性表达之间具有正相关性(r=0.372,P=0.001),HIF-2α阳性表达与A2aR阳性表达之间未发现明显相关性(r=0.157,P=0.187)。6.进行HIF-2α、CD73、A2aR生存分析发现:HIF-2α阴性表达组生存率优于HIF-2α阳性表达组(Log-Rank,c~2=5.563,P=0.018),CD73阴性表达组生存率优于CD73阳性表达组(Log-Rank,c~2=4.09,P=0.043),A2aR不同表达组间未发现生存率差异(Log-Rank,c~2=0.849,P=0.357)。多变量COX回归分析发现,NSCLC中CD73阳性表达(HR=2.524,95%CI:1.167~5.458),TNM高分期(HR=6.033,95%CI:2.729~13.340),有淋巴结转移(HR=0.321,95%CI:0.109~0.941)死亡风险升高。可见CD73可作为NSCLC患者不良预后的独立预测指标。7.72例NSCLC标本MVD计数(`x±s)为:37.86±12.74,其中III期患者较I&II期患者(49.72±10.44 vs 31.55±8.75)(t=-7.836,P=0.000)、肿瘤直径>3cm较肿瘤直径≤3cm(39.82±12.41 vs 31.53±12.02)(t=-2.423,P=0.018)、淋巴结转移组较无淋巴结转移组(47.13±10.76 vs 31.24±9.56)(t=-6.600,P=0.000)MVD计数显著升高。8.HIF-2α阳性组较HIF-2α阴性组MVD计数显著升高(41.81±12.491 vs29.96±9.196),差异具有统计学意义(t=-4.119,P=0.000),HIF-2α阳性表达与MVD计数升高具有中度相关性(r=0.442,P=0.000)。CD73阳性组较CD73阴性组MVD计数显著升高(41.71±11.592 vs 28.52±10.543),差异具有统计学意义(t=-4.498,P=0.000),CD73阳性表达与MVD计数升高具有中度相关性(r=0.474,P=0.000)。A2aR阳性组与阴性组间MVD计数无明显差异(t=-0.208,P=0.836)。结论:本研究发现,在NSCLC中,缺氧途径的关键靶点HIF-2α和腺苷途径的关键靶点CD73、A2aR高表达,其中HIF-2α、CD73阳性表达与肿瘤发展、转移、不良预后、肿瘤新生血管生成密切相关,并且CD73阳性可作为不良预后的独立预测指标;而A2aR阳性表达与女性、腺癌有关,与不良预后及肿瘤新生血管生成无关。HIF-2α阳性表达与CD73阳性表达正相关,而与A2aR阳性表达无关,CD73阳性表达与A2aR阳性表达正相关。这表明在NSCLC中,缺氧途径和腺苷途径存在密切的关系,并且二者均与肿瘤新生血管生成相关,与肿瘤恶性程度及不良预后有关,HIF-2α、CD73、A2aR有可能成为NSCLC治疗的潜在靶点。但因样本数有限,相关蛋白的表达情况及具体作用机制尚需进一步研究。