苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)具有特异性杀虫活性,被广泛应用于害虫防治。随着Bt应用的不断扩大,Bt作为杀虫剂的不足也日益显现,主要表现为杀虫速度慢、昆虫产生抗性等,这些促使人们在分子水平上来研究Bt杀虫晶体蛋白的杀虫机制,同时希望通过Bt基因的结构域交换对Bt基因进行分子改造,目的是提高Bt基因的毒力和扩大杀虫谱,为开发具有自主知识产权的Bt基因提供参考。在前期研究的基础上,通过结构域交换的方法获得了一个新型抗鳞翅目害虫的基因cryNGc,并将其构建至含有抗草铵膦bar基因的植物表达载体中。该基因含有Cry1Ab的结构域Ⅰ、结构域Ⅱ以及Cry1Gc的结构域Ⅲ。并通过农杆菌介导法,将cryNGc基因转入玉米植株中,利用PCR、RT-PCR和蛋白免疫试纸条测试方法等对基因cryNGc进行了分子检测,除此之外,通过室内和田间玉米螟抗虫性测定方法,开展了分子鉴定和抗性评价等研究。研究结果表明:通过对转基因玉米的核酸检测和蛋白检测证明了cryNG 基因成功整合至玉米植株中,且能够成功转录并表达;抗虫性检测证明了转cryNGc基因玉米植株对亚洲玉米螟有良好的抗虫性。选取了对鞘翅目害虫具有特异性杀虫活性的cry3和cry8类中的9个基因,同样采取结构域互换的方法,建立了一个含有52个新基因的突变体库,期望从中可以筛选出对鞘翅目具有高毒力广谱的新型杀虫基因。从该突变体库中选取了一个重组突变体ACA,进行表达载体的构建及蛋白诱导表达。突变体ACA包含了 Cry3Aa的结构域Ⅰ、Cry8Ca的结构域Ⅱ和Cry3Aa的结构域Ⅲ。研究结果表明:通过结构域交换的方法得到的重组突变体AC4,该基因片段长度为1968 bp,编码656个氨基酸。将该基因构建至原核表达载体PET-28a中,并将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,目的蛋白大小约70kDa,为后续毒素蛋白对鞘翅目害虫的杀虫活性测定等奠定了基础。