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目的：(1)通过基因工程技术克隆多房棘球绦虫Em18抗原。(2)将HRP标记在基因工程制备的Em18抗原上,利用双抗原夹心法,制备泡状棘球蚴快速诊断试剂盒。方法：(1)从多房棘球蚴中使用RNA提取试剂盒提取RNA,反转录成cDNA,通过克隆、构建、测序,利用DNAman软件对Em18基因特点进行分析并构建Em18核酸序列。用DNAman软件设计引物,分别在5’端3’端添加EcoRI和Xhol酶切位点,以pET28a/Em18原核表达质粒为模板,PCR扩增Em18基因片断,经酶切,转化入大肠埃希菌表达载体BL21,酶切、PCR及测序鉴定其插入序列的正确性。扩增出Em18抗原,测序鉴定序列正确。(2)经IPTG诱导表达rEm18,洗脱纯化,蔗糖浓缩,通过SDS-PAGE电泳和Western blot试验鉴定重组蛋白的表达水平。(3)采用HRP标记基因重组抗原。(4)棋盘法筛选抗原包被浓度,酶标抗原稀释倍数,待检抗体稀释倍数,利用双抗原夹心法制备Em18泡状棘球蚴快速诊断试剂盒。结果：(1)成功克隆并构建了pET28a/Em18原核表达质粒,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测表明pET28a/Em18重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为50kD处有表达条带。(2) Western Blot分析显示rEm18蛋白能被多房棘球蚴病人阳性血清识别,具有良好的抗原性。(3)通过酶结合物的评价指标判断HRP成功标记抗原。将重组蛋白包被在酶联板上,按照已筛选好的条件进行组装试剂盒,选择待测样本,检测出试剂盒具有较高的敏感性和特异性。(4)通过单盲法利用配对χ2检验比较双抗原夹心法和斑点免疫胶体金法同金标准(手术)的敏感性和特异性。P<0.05,差异有统计学意义。结论：运用基因克隆技术对Em18抗原进行克隆,并成功表达、鉴定、浓缩和纯化,成功使用HRP标记重组抗原,利用棋盘滴定法筛选出试剂盒各因素最适条件,通过ELISA双抗原夹心法原理组装试剂盒,采用配对χ2检验比较双抗原夹心法和斑点免疫胶体金法同金标准的敏感性和特异性。χ2=5.1,P<0.05,差异有统计学意义。