基因沉默HMGA1调控前列腺癌细胞生长与凋亡研究

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本研究选择肿瘤细胞高表达的高迁移率族蛋白A1(The high mobility groupA1,HMGA1)分子作为干扰靶点,将pU6mRFPsiRNA-HMGA1重组质粒转染至人前列腺癌细胞PC-3M,检测基因沉默HMGA1对前列腺癌细胞PC-3M生长与凋亡的影响,为进一步研究HMGA1在前列腺癌细胞中的生物学功能提供实验依据。采用RT-PCR、免疫细胞化学技术检测PC-3M细胞HMGA1基因mRNA与蛋白表达;采用脂质体转染法将pU6mRFPsiRNA-HMGA1重组质粒瞬时转染至前列腺癌细胞PC-3M,倒置荧光显微镜观察转染效率;RT-PCR、WesternBlot及免疫荧光细胞化学技术检测pU6mRFPsiRNA-HMGA1基因转染后PC-3M细胞HMGA1mRNA和蛋白水平的表达;MTT法与平板克隆实验检测基因转染后PC-3M细胞的增殖活性与克隆形成能力;流式细胞术(FACS)检测HMGA1基因沉默后细胞凋亡变化;RT-PCR检测肿瘤细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、p53、DR3与免疫抑制相关因子TGF-β、IL-10、VEGF和FasL mRNA表达水平变化。结果表明:PC-3M细胞中HMGA1mRNA及蛋白高表达;将pU6mRFPsiRNA-HMGA1重组质粒瞬时转染至PC-3M细胞,转染效率大约在50%-60%;基因沉默组(pU6mRFPsiRNA-HMGA1RNAi)与细胞对照组及空载体组比较,HMGA1在mRNA及蛋白水平的表达均降低;细胞增殖活性与细胞克隆形成能力降低(p<0.05);流式细胞术结果显示pU6mRFPsiRNA-HMGA1RNAi组细胞凋亡百分率(61.9%)显著高于PC-3M组(4.5%)和pU6mRFP组(4.49%);基因沉默组可抑制凋亡相关因子Bcl-2与DR3mRNA表达,促进p53、Bax基因mRNA的表达;基因沉默组可抑制免疫抑制相关因子VEGF、FasL、TGF-β、IL-10mRNA的表达。研究结果提示:沉默HMGA1基因可以抑制前列腺癌细胞PC-3M的增殖活性和克隆形成能力;沉默HMGA1基因可促进前列腺癌细胞PC-3M凋亡;沉默HMGA1基因可以抑制前列腺癌细胞PC-3M抑凋亡相关因子的表达,增强促凋亡因子的表达;沉默HMGA1基因可以抑制免疫抑制相关因子mRNA表达。此研究为HMGA1作为肿瘤基因治疗的分子靶点提供了实验基础与理论依据。
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