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目前耳聋胶囊的研究多集中于临床有效性,多年临床研究表明耳聋胶囊在治疗听力损失等耳部疾病方面有着显著疗效。然而目前耳聋胶囊化学成分尚缺乏系统研究,化学成分谱仍不完善,其药效物质基础和作用机制仍尚不明确,这些现状限制了耳聋胶囊临床应用的进一步扩大。本研究首先采用UPLC-Q-TOF-MS/MS和GC-MS技术对耳聋胶囊的化学成分进行表征分析,在丰富耳聋胶囊化学成分谱的基础上对耳聋胶囊入血成分和靶组织分布情况进行分析,探索其药效物质基础。采用药效学对耳聋胶囊治疗庆大霉素所致听力损失大鼠的疗效进行评价,并采用代谢组学和网络药理学整合分析策略将上游和下游研究串联起来探讨了其作用机制,并对相关关键靶点进行实验验证。本课题所采用的“成分-药效-代谢-靶标”这一综合分析策略遵循了中医药理论的整体观和系统观,为耳聋胶囊防治庆大霉素所致听力损失提供实验依据,有利于为庆大霉素所致听力损失的患者带来福音。具体研究结果如下:1、采用UPLC-Q-TOF-MS/MS法对耳聋胶囊中的化学成分进行快速分析,应用Analyst IF1.7.1、Peakview2.2软件结合对照品、Natural products HR-MS/MS Spectral Library1.1质谱数据库及文献报道对耳聋胶囊的化学成分进行鉴定并明确其药材归属,最终采用“对照品-数据库-文献报道”的综合分析方法从耳聋胶囊中共分离并鉴定出130个化学成分,包括46个黄酮及其苷类、30个萜类、10个苯酞类、4个香豆素类、6个苯乙醇苷类、12个有机酸类、13个含氮类及9个其他类,其中9个来源于君药龙胆,21个来源于臣药黄芩,36个来源于臣药栀子,16个来源于地黄,3个来源于木通,11个来源于泽泻,19个来源于当归,4个来源于九节菖蒲,9个来源于羚羊角,23个来源于甘草,山柰酚为龙胆和栀子的共有成分,绿原酸及亚油酸为栀子和当归的共有成分,蔗糖和棕榈酸归属于全部药味,以典型化合物为例具体分析了每一类化合物的碎片裂解规律。通过对耳聋胶囊中化学成分的鉴定,为耳聋胶囊后续药效物质基础研究奠定了化学物质基础。2、采用GC-MS法对耳聋胶囊分析供试品溶液中挥发性化学成分进行鉴定,应用质谱计算机软件结合NIST08.L库检索以及人工图谱解析,对耳聋胶囊石油醚提取液中相似度≥90的化合物予以确认,采用峰面积归一化法计算各组分的相对百分含量,共鉴定出24个挥发性成分,占总峰面积的30.51%,主要包括邻苯二甲酸二甲酯、丁烯基苯酞、（D）-柠檬烯和藁本内酯等。通过对耳聋胶囊丸中挥发油成分进行鉴定,更加全面的丰富了耳聋胶囊中的化学成分谱。3、采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对耳聋胶囊给药后吸收入血的原型成分进行鉴定分析。应用Peakview2.2/Masterview 1.3处理软件在规定的误差范围内（误差±5ppm）对空白血浆、给药血浆样品进行快速定性分析,主要根据测得的化合物精确相对分子质量,结合各个成分色谱峰的保留时间、二级质谱碎片信息、HR-MS/MS Spectral Library 1.1质谱数据库、文献报道数据及部分对照品比对,对耳聋胶囊灌胃大鼠血浆原型成分进行快速定性分析。最终共定性鉴别出45个入血原型成分,包括13个萜类、9个有机酸类、6个黄酮及其苷类、5个苯酞类、4个含氮类、1个香豆素类、1个苯乙醇苷类和6个其他类,主要包括龙胆苦苷、黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素、23-乙酰泽泻醇B等。本研究明确了耳聋胶囊在大鼠血中有暴露的成分,推测为其潜在的药效物质。4、采用UPLC-Q-TOF-MS/MS法对耳聋胶囊给药后在大鼠耳蜗、肝和肾组织中的分布情况进行研究。通过对相同色谱、质谱条件下耳聋胶囊灌胃前后大鼠空白和含药耳蜗、肝和肾组织以及耳聋胶囊提取液中成分的色谱图和质谱信息进行对比,包括母离子提取、保留时间及质谱裂解规律等,同时结合部分对照品溶液信息,对耳聋胶囊灌胃大鼠靶组织分布成分进行定性鉴别和分析。耳聋胶囊给药前后大鼠耳蜗组织中共定性鉴别出17个入血原型成分,包括汉黄芩苷、甘草次酸、黄芩苷和京尼平苷酸等,耳聋胶囊给药前后大鼠肝组织中共定性鉴别出17个入血原型成分,包括龙胆苦苷、汉黄芩苷、甘草次酸、黄芩苷、京尼平苷酸和甘草素等,耳聋胶囊给药前后大鼠肾组织中共定性鉴别出22个入血原型成分,包括龙胆苦苷、黄芩苷、汉黄芩苷和原儿茶酸等。由此分析推测出可能在靶组织耳蜗、肝和肾组织中发挥药效的化合物,为耳聋胶囊的药效物质基础研究和临床应用提供依据。5、采用硫酸庆大霉素肌肉注射制备庆大霉素所致听力损失的大鼠模型,根据耳聋胶囊说明书按照人-鼠剂量换算公式设置低、高剂量对模型大鼠予以治疗,对耳聋胶囊防治庆大霉素致听力损失大鼠的听力改善作用进行药效学评价,同时选用耳聋左慈丸为阳性药,采用DPOAE耳声发射检测仪对听力损失大鼠的耳蜗神经功能进行测试,并以T-SOD、MDA生化指标观察耳聋胶囊对模型大鼠的疗效,结果显示在2 KHz、4 KHz、6KHz三个刺激频率状态下,耳聋胶囊均能有效改善听力损失大鼠的毛细胞神经功能。耳聋胶囊对庆大霉素所致听力损失的大鼠有明显疗效,且耳聋胶囊高剂量组治疗效果普遍优于耳聋胶囊低剂量组。生化指标含量测定在氧化应激方面同样印证了上述结果。6、通过非靶向血浆代谢组学技术对庆大霉素所致听力损失的大鼠血浆差异代谢物和经耳聋胶囊治疗后大鼠血浆差异代谢物的表达水平进行考察,并构建相关代谢通路,旨在从内源性代谢物层面初步探讨耳聋胶囊治疗庆大霉素所致听力损失的作用机制。最终共筛选出21个模型大鼠的血浆差异代谢物,包括酪氨酸、甘露醇、天冬氨酸-谷氨酸、鞘氨醇、牛磺熊去氧胆酸、Lyso PC（18:0/0:0）、谷氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、肌醇、马尿酸、3-吲哚乙酸、丙酮酸、（6）-姜辣素、谷氨酰胺、亮氨酸、鞘氨醇-1-磷酸盐、谷胱甘肽、Lyso PC（17:0）、Lyso PC（16:0/0:0）和别孕烯醇酮,且均能在耳聋胶囊干预后呈现回调趋势;与模型组相比,耳聋胶囊还能回调15个差异代谢物,包括脯氨酸、蛋氨酸、瓜氨酸、琥珀酸、甘氨酸、柠檬酸、精氨酸、乳酸、抗坏血酸、半乳糖、牛磺酸、亚麻酸、Lyso PC 18:1、亚油酸和花生四烯酸,各离子主要介导效应包括抗氧化、抗炎和抑制细胞凋亡等。7、在前期入血/组织成分的研究基础上,进一步运用网络药理学、分子对接和实验验证相结合的方法对耳聋胶囊治疗庆大霉素所致听力损失的分子作用机制进行初步探究,得到耳聋胶囊治疗庆大霉素所致听力损失的5个关键靶点,分别为AKT1、IL6、TP53、TNF和CASP3,且氨基酸除外的40个入血成分与此5个关键靶点均有较好的自由结合能,PCR实验验证呈现显著差异。8、最后将代谢组学和网络药理学结果进行整合分析,构建了“核心靶点-信号通路-生物学功能-代谢通路-耳聋胶囊调节的差异代谢物”网络,最终推测耳聋胶囊治疗庆大霉素所致听力损失的机制可能是14个主要活性成分（黄芩素、汉黄芩苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、野黄芩素4’,7-二甲基醚、栀子花乙酸、柠檬酸、甘草素、黄芩苷、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、龙胆苦苷、汉黄芩素、原儿茶酸和琥珀酸）通过调节5个核心靶蛋白（AKT1、TP53、IL6、TNF和CASP3）及相关信号通路和代谢通路,介导7个主要代谢生物标志物（苯丙氨酸、酪氨酸、甘氨酸、丙酮酸、乳酸、谷氨酸和谷氨酰胺）的差异表达。本研究采用多维关联模式结合成分（化学物质组的表征、大鼠体内入血原型成分、靶组织分布研究）-药效（DPOAE、生化指标）-网路药理学和分子对接（靶点、通路、实验验证）-代谢组学（差异代谢物、代谢途径）阐明了耳聋胶囊的化学成分、在血浆中能产生显著暴露的成分、进入靶组织的成分,以及发挥治疗庆大霉素所致听力损失功效的分子作用机制。