它莫西芬对仔猪子宫内膜上皮细胞MUC1和CD44的影响

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哺乳动物胚胎和子宫内膜相互作用的分子机制仍然是细胞发育生物学上的难题。从临床上来看,虽然人工受精和胚胎移植技术在近十年取得进步,但胚胎植入的成功率还是没有想象中那样好,这提示我们子宫在胚胎植入过程中起着重要的调节作用。子宫内一些重要的分子(包括可溶性分子和细胞表面分子)调节着胚胎植入过程。另一方面,在不同物种中,子宫接受胚胎的能力受到子宫内类固醇激素的影响。探讨哪些分子有利于胚泡着床显得尤为重要。研究表明,糖蛋白MUC-1的过表达可以阻止细胞与基质之间的黏附,因此在胚胎植入时,MUC-1在子宫上皮细胞的高表达可以阻止胚胎着床,而MUC-1的下调是胚胎植入“窗口”所必须。CD44是在子宫上皮的另一种糖蛋白,.在早孕、假孕和不孕兔子子宫内,研究者发现:在非孕兔子宫内膜上皮中无此显型的表达,在假孕兔中有弱表达且出现晚。而CD44在孕期第6天,即胚泡植入前1d,便开始在子宫内膜上皮细胞表达,通过分析,证实其表达增多。CD44在植入前的兔子宫内膜上皮细胞的表达模式,提示其可能参与植入过程。在本实验中,我们通过细胞培养、RT-PCR和免疫荧光等方法,检测了CD44和MUC-1在猪子宫内膜上皮细胞的表达。同时检验选择性雌激素受体调节剂它莫西芬是否调节CD44和MUC-1分子的表达,结果如下:1.无菌采取猪子宫,用0.1%胶原酶消化分离子宫内膜细胞,于37℃,5%C02下培养。结果表明,70%细胞在24 h内贴壁,4~5d长成单层,培养的细胞呈单层贴壁生长。通过对内膜细胞的纯化,纯化的细胞培养后有18-24 h的滞留期,然后进入对数生长期,可持续2-4 d,第7天进入平台期,第8天开始脱落。2.用CD44和MUC-1单克隆抗体通过免疫荧光检测,我们发现CD44和MUC-1在细胞质和细胞浆中表达。同时通过RT-PCR技术发现CD44和MUC-1 mRNA在子宫内膜上皮细胞中表达。3.为了进一步检测CD44和MUC-1的表达受一些外源因子调控,我们在培养的子宫内膜上皮细胞中加入选择性雌激素受体调节剂它莫西芬对细胞进行处理,流式分析和Western blot的结果表明:它莫西芬对细胞处理后,CD44阳性的细胞数增加,MUC-1阳性细胞数不变,说明它莫西芬有可能调节着胚胎植入过程。
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